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[發(fā)明專利]酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程在審

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 201711375909.5 申請(qǐng)日: 2017-12-19
公開(公告)號(hào): CN108152503A 公開(公告)日: 2018-06-12
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 鄒永龍;馬欣 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 上海瀾帆實(shí)業(yè)有限公司
主分類號(hào): G01N33/66 分類號(hào): G01N33/66;G01N33/531
代理公司: 暫無(wú)信息 代理人: 暫無(wú)信息
地址: 200333 上海市嘉*** 國(guó)省代碼: 上海;31
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 酶聯(lián)免疫 靶標(biāo)分子 斑點(diǎn)印跡 自身免疫 檢測(cè)試劑 制備 操作流程 富集 免疫細(xì)胞 試劑盒 檢測(cè) 制備細(xì)胞裂解液 斑點(diǎn)印跡技術(shù) 臨床樣品檢測(cè) 擴(kuò)增培養(yǎng)基 人免疫細(xì)胞 高靈敏度 技術(shù)結(jié)合 數(shù)據(jù)分析 假陽(yáng)性 盒體 抗體 血糖 升高 分析
【說(shuō)明書】:

發(fā)明公開了一種酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程,酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒包括盒體、靶標(biāo)分子及試劑,所述試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡與富集相結(jié)合的技術(shù),用于檢測(cè)自身免疫功能的缺陷導(dǎo)致的血糖異常的試劑盒。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒的操作流程包括制備靶標(biāo)分子、制備靶標(biāo)分子的覆被裝置、制備細(xì)胞裂解液、制備抗人免疫細(xì)胞抗體及免疫細(xì)胞富集、制備擴(kuò)增培養(yǎng)基、檢測(cè)靶標(biāo)分子及臨床樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)分析。本發(fā)明是一種免疫細(xì)胞富集技術(shù)結(jié)合具有高靈敏度和高特異性的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡技術(shù),及對(duì)相應(yīng)的靶標(biāo)分子的精準(zhǔn)分析,使得對(duì)的檢測(cè)特異性升高和假陽(yáng)性幾率降低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及1型糖尿病的特異性輔助診斷技術(shù)領(lǐng)域,具體是一種酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程。

背景技術(shù)

糖尿病是現(xiàn)今威脅人類健康最嚴(yán)重的疾病之一,根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報(bào)告,全球18歲以上成人糖尿病患病率從1980年的4.7%增加到2014年的8.5%。近年來(lái)隨著生活條件的改善,中國(guó)的糖尿病患病也逐年遞增,總患病人數(shù)已經(jīng)接近一億。尤其在某些相對(duì)發(fā)達(dá)的地區(qū)除發(fā)病人數(shù)逐年上升,還呈現(xiàn)出年輕化的趨勢(shì)。

糖尿病是一種以高血糖(空腹血糖高于7.0毫摩爾/升)為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物活性作用受損,或兩者兼有引起。糖尿病可由遺傳或環(huán)境單獨(dú)或者共同作用而致病。臨床表現(xiàn)為多飲、多尿、多食和消瘦(三多一少)的主要是1型糖尿病。而疲乏無(wú)力,肥胖多是2型糖尿病的癥狀。糖尿病對(duì)患者健康的危害主要是因?yàn)轶w內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間的高血糖環(huán)境導(dǎo)致各種組織,如眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害甚至功能喪失。有數(shù)據(jù)顯示2012年有220萬(wàn)例死亡可歸咎于糖尿病,而在2015年,糖尿病直接造成160萬(wàn)例死亡,世界衛(wèi)生組織由此推測(cè)到糖尿病將成為第七位主要死因。

1型糖尿病發(fā)病年齡輕,大多低于30歲,起病突然,不少患者以酮癥酸中毒為首發(fā)癥狀,血清胰島素和C肽水平低下,ICA、IAA或GAD抗體可呈陽(yáng)性。致病的因素很多包括受污染的自然和生活環(huán)境、自身因素如遺傳缺陷和病毒感染等。與2型糖尿病的發(fā)病機(jī)理完全不同,1型糖尿病主要是由于自體免疫系統(tǒng)攻擊并最終殺死體內(nèi)所有產(chǎn)生胰島素的胰島β細(xì)胞引起的。通過(guò)免疫檢測(cè)手段已經(jīng)確認(rèn)超過(guò)98%的1型糖尿病病人體內(nèi)可以找到至少一種自身免疫抗體。

因此,在現(xiàn)有技術(shù)中,檢測(cè)特異性差、假陽(yáng)性幾率高及精準(zhǔn)度差等問(wèn)題,設(shè)計(jì)一種酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程,是目前需要解決的技術(shù)問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的:針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足,解決存在檢測(cè)特異性差、假陽(yáng)性幾率高及精準(zhǔn)度差等問(wèn)題,申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)多次實(shí)踐改進(jìn),設(shè)計(jì)了一種酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程。

技術(shù)方案:為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的,本發(fā)明提供了酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程,酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒包括盒體、靶標(biāo)分子及試劑,所述試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡與富集相結(jié)合的技術(shù),用于檢測(cè)自身免疫功能的缺陷導(dǎo)致的血糖異常的試劑盒。

所述靶標(biāo)分子是抗原(ICA、IAA、GAD、PTPRN、1A-2A、ZnT8A)純化后的多肽經(jīng)過(guò)標(biāo)定以后,稀釋至20-100微克每毫升以后,被鋪被到96孔的PVDF膜上,然后用牛血清蛋白作封閉處理,最后經(jīng)過(guò)特殊干燥工藝和真空封膜處理后可長(zhǎng)期保存,所述試劑包括細(xì)胞裂解液、抗人免疫細(xì)胞抗體、免疫細(xì)胞富集及擴(kuò)增培養(yǎng)基,所述細(xì)胞裂解液主要成分是HEPES0.1-0.3M,氯化鋁0.15-0.3M,EDTA鉀0.1-0.4M,碳酸鉀0.2-0.4M,0.35-0.6M甘油等,所述抗人免疫細(xì)胞抗體是通過(guò)從山羊或小鼠制備的抗人免疫細(xì)胞抗體,所述擴(kuò)增培養(yǎng)基一種用于免疫細(xì)胞上,使其增加細(xì)胞生長(zhǎng)和刺激因子的RPMI1640擴(kuò)增培養(yǎng)基;

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程,包括以下幾個(gè)操作流程:

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