[發明專利]酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒及其操作流程

在審

• 申請號: 201711375909.5
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108152503A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 鄒永龍;馬欣
• 申請（專利權）人: 上海瀾帆實業有限公司
• 主分類號: G01N33/66
• 分類號: G01N33/66;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒及其操作流程，酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒包括盒體、靶標分子及試劑，所述試劑盒是一種基于酶聯免疫斑點印跡與富集相結合的技術，用于檢測自身免疫功能的缺陷導致的血糖異常的試劑盒。酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒的操作流程包括制備靶標分子、制備靶標分子的覆被裝置、制備細胞裂解液、制備抗人免疫細胞抗體及免疫細胞富集、制備擴增培養基、檢測靶標分子及臨床樣品檢測數據分析。本發明是一種免疫細胞富集技術結合具有高靈敏度和高特異性的酶聯免疫斑點印跡技術，及對相應的靶標分子的精準分析，使得對的檢測特異性升高和假陽性幾率降低。

技術領域

本發明涉及1型糖尿病的特異性輔助診斷技術領域，具體是一種酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒及其操作流程。

背景技術

糖尿病是現今威脅人類健康最嚴重的疾病之一，根據世界衛生組織的報告，全球18歲以上成人糖尿病患病率從1980年的4.7％增加到2014年的8.5％。近年來隨著生活條件的改善，中國的糖尿病患病也逐年遞增，總患病人數已經接近一億。尤其在某些相對發達的地區除發病人數逐年上升，還呈現出年輕化的趨勢。

糖尿病是一種以高血糖(空腹血糖高于7.0毫摩爾/升)為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物活性作用受損，或兩者兼有引起。糖尿病可由遺傳或環境單獨或者共同作用而致病。臨床表現為多飲、多尿、多食和消瘦(三多一少)的主要是1型糖尿病。而疲乏無力，肥胖多是2型糖尿病的癥狀。糖尿病對患者健康的危害主要是因為體內長時間的高血糖環境導致各種組織，如眼、腎、心臟、血管、神經的慢性損害甚至功能喪失。有數據顯示2012年有220萬例死亡可歸咎于糖尿病，而在2015年，糖尿病直接造成160萬例死亡，世界衛生組織由此推測到糖尿病將成為第七位主要死因。

1型糖尿病發病年齡輕，大多低于30歲，起病突然，不少患者以酮癥酸中毒為首發癥狀，血清胰島素和C肽水平低下，ICA、IAA或GAD抗體可呈陽性。致病的因素很多包括受污染的自然和生活環境、自身因素如遺傳缺陷和病毒感染等。與2型糖尿病的發病機理完全不同，1型糖尿病主要是由于自體免疫系統攻擊并最終殺死體內所有產生胰島素的胰島β細胞引起的。通過免疫檢測手段已經確認超過98％的1型糖尿病病人體內可以找到至少一種自身免疫抗體。

因此，在現有技術中，檢測特異性差、假陽性幾率高及精準度差等問題，設計一種酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒及其操作流程，是目前需要解決的技術問題。

發明內容

發明目的：針對現有技術的缺陷和不足，解決存在檢測特異性差、假陽性幾率高及精準度差等問題，申請人經過多次實踐改進，設計了一種酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒及其操作流程。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明提供了酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒及其操作流程，酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒包括盒體、靶標分子及試劑，所述試劑盒是一種基于酶聯免疫斑點印跡與富集相結合的技術，用于檢測自身免疫功能的缺陷導致的血糖異常的試劑盒。

所述靶標分子是抗原(ICA、IAA、GAD、PTPRN、1A-2A、ZnT8A)純化后的多肽經過標定以后，稀釋至20-100微克每毫升以后，被鋪被到96孔的PVDF膜上，然后用牛血清蛋白作封閉處理，最后經過特殊干燥工藝和真空封膜處理后可長期保存，所述試劑包括細胞裂解液、抗人免疫細胞抗體、免疫細胞富集及擴增培養基，所述細胞裂解液主要成分是HEPES0.1-0.3M，氯化鋁0.15-0.3M，EDTA鉀0.1-0.4M，碳酸鉀0.2-0.4M，0.35-0.6M甘油等，所述抗人免疫細胞抗體是通過從山羊或小鼠制備的抗人免疫細胞抗體，所述擴增培養基一種用于免疫細胞上，使其增加細胞生長和刺激因子的RPMI1640擴增培養基；

酶聯免疫斑點印跡的自身免疫檢測試劑盒及其操作流程，包括以下幾個操作流程：