[發(fā)明專利]酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711375909.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN108152503A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒永龍;馬欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海瀾帆實(shí)業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/66
• 分類號(hào): G01N33/66;G01N33/531
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開了一種酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒包括盒體、靶標(biāo)分子及試劑，所述試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡與富集相結(jié)合的技術(shù)，用于檢測(cè)自身免疫功能的缺陷導(dǎo)致的血糖異常的試劑盒。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒的操作流程包括制備靶標(biāo)分子、制備靶標(biāo)分子的覆被裝置、制備細(xì)胞裂解液、制備抗人免疫細(xì)胞抗體及免疫細(xì)胞富集、制備擴(kuò)增培養(yǎng)基、檢測(cè)靶標(biāo)分子及臨床樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)分析。本發(fā)明是一種免疫細(xì)胞富集技術(shù)結(jié)合具有高靈敏度和高特異性的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡技術(shù)，及對(duì)相應(yīng)的靶標(biāo)分子的精準(zhǔn)分析，使得對(duì)的檢測(cè)特異性升高和假陽(yáng)性幾率降低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及1型糖尿病的特異性輔助診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程。

背景技術(shù)

糖尿病是現(xiàn)今威脅人類健康最嚴(yán)重的疾病之一，根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報(bào)告，全球18歲以上成人糖尿病患病率從1980年的4.7％增加到2014年的8.5％。近年來(lái)隨著生活條件的改善，中國(guó)的糖尿病患病也逐年遞增，總患病人數(shù)已經(jīng)接近一億。尤其在某些相對(duì)發(fā)達(dá)的地區(qū)除發(fā)病人數(shù)逐年上升，還呈現(xiàn)出年輕化的趨勢(shì)。

糖尿病是一種以高血糖(空腹血糖高于7.0毫摩爾/升)為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物活性作用受損，或兩者兼有引起。糖尿病可由遺傳或環(huán)境單獨(dú)或者共同作用而致病。臨床表現(xiàn)為多飲、多尿、多食和消瘦(三多一少)的主要是1型糖尿病。而疲乏無(wú)力，肥胖多是2型糖尿病的癥狀。糖尿病對(duì)患者健康的危害主要是因?yàn)轶w內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間的高血糖環(huán)境導(dǎo)致各種組織，如眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害甚至功能喪失。有數(shù)據(jù)顯示2012年有220萬(wàn)例死亡可歸咎于糖尿病，而在2015年，糖尿病直接造成160萬(wàn)例死亡，世界衛(wèi)生組織由此推測(cè)到糖尿病將成為第七位主要死因。

1型糖尿病發(fā)病年齡輕，大多低于30歲，起病突然，不少患者以酮癥酸中毒為首發(fā)癥狀，血清胰島素和C肽水平低下，ICA、IAA或GAD抗體可呈陽(yáng)性。致病的因素很多包括受污染的自然和生活環(huán)境、自身因素如遺傳缺陷和病毒感染等。與2型糖尿病的發(fā)病機(jī)理完全不同，1型糖尿病主要是由于自體免疫系統(tǒng)攻擊并最終殺死體內(nèi)所有產(chǎn)生胰島素的胰島β細(xì)胞引起的。通過(guò)免疫檢測(cè)手段已經(jīng)確認(rèn)超過(guò)98％的1型糖尿病病人體內(nèi)可以找到至少一種自身免疫抗體。

因此，在現(xiàn)有技術(shù)中，檢測(cè)特異性差、假陽(yáng)性幾率高及精準(zhǔn)度差等問(wèn)題，設(shè)計(jì)一種酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程，是目前需要解決的技術(shù)問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，解決存在檢測(cè)特異性差、假陽(yáng)性幾率高及精準(zhǔn)度差等問(wèn)題，申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)多次實(shí)踐改進(jìn)，設(shè)計(jì)了一種酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒包括盒體、靶標(biāo)分子及試劑，所述試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡與富集相結(jié)合的技術(shù)，用于檢測(cè)自身免疫功能的缺陷導(dǎo)致的血糖異常的試劑盒。

所述靶標(biāo)分子是抗原(ICA、IAA、GAD、PTPRN、1A-2A、ZnT8A)純化后的多肽經(jīng)過(guò)標(biāo)定以后，稀釋至20-100微克每毫升以后，被鋪被到96孔的PVDF膜上，然后用牛血清蛋白作封閉處理，最后經(jīng)過(guò)特殊干燥工藝和真空封膜處理后可長(zhǎng)期保存，所述試劑包括細(xì)胞裂解液、抗人免疫細(xì)胞抗體、免疫細(xì)胞富集及擴(kuò)增培養(yǎng)基，所述細(xì)胞裂解液主要成分是HEPES0.1-0.3M，氯化鋁0.15-0.3M，EDTA鉀0.1-0.4M，碳酸鉀0.2-0.4M，0.35-0.6M甘油等，所述抗人免疫細(xì)胞抗體是通過(guò)從山羊或小鼠制備的抗人免疫細(xì)胞抗體，所述擴(kuò)增培養(yǎng)基一種用于免疫細(xì)胞上，使其增加細(xì)胞生長(zhǎng)和刺激因子的RPMI1640擴(kuò)增培養(yǎng)基；

酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)印跡的自身免疫檢測(cè)試劑盒及其操作流程，包括以下幾個(gè)操作流程：