[發(fā)明專利]人溶菌酶基因的合成及其表達產(chǎn)物的構(gòu)建方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711374919.7 | 申請日： | 2017-12-19 |
| 公開（公告）號： | CN108165567A | 公開（公告）日： | 2018-06-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉燊;李浩杰;張輝華;楊雪珍;林樹茂 | 申請（專利權(quán)）人： | 佛山科學技術(shù)學院 |
| 主分類號： | C12N15/56 | 分類號： | C12N15/56;C12N15/81;C12N9/36 |
| 代理公司： | 廣州嘉權(quán)專利商標事務(wù)所有限公司 44205 | 代理人： | 謝泳祥 |
| 地址： | 528000 廣東省佛山市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 人溶菌酶基因 氨基酸序列 畢赤酵母 表達產(chǎn)物 密碼子 構(gòu)建 合成 稀有密碼子 基因序列 人溶菌酶 真核表達 重組蛋白 優(yōu)化 | ||
1.一種人溶菌酶基因針對畢赤酵母優(yōu)化表達的序列，如SEQ ID No.1所示。
2.構(gòu)建表達人溶菌酶重組菌的方法，包括以下步驟：
1)按權(quán)利要求1所述序列合成人溶菌酶基因片段，其兩端分別加入酶切位點Xho I和Not I；
2)步驟1的基因片段通過雙酶切插入質(zhì)粒pPICZαA中，構(gòu)建表達載體pPICZαA-hLZ；
3)將表達載體pPICZαA-hLZ通過電轉(zhuǎn)化至畢赤酵母X-33。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟2和3之間還包括步驟：2’)利用大腸桿菌Top10進行表達載體pPICZαA-hLZ的單克隆擴增。
4.一種制備人溶菌酶的方法，其特征在于，使用根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的構(gòu)建方法獲得的表達人溶菌酶重組菌，以甲醇誘導表達，通過親和層析樹脂純化獲得人溶菌酶；所述表達步驟和純化步驟包括：擴大培養(yǎng)含人溶菌酶重組菌4L，收集培養(yǎng)基進行下游純化，取誘導96h后的培養(yǎng)液離心，上清液用0.22um膜過濾，在4℃環(huán)境下透析16h，緩沖液50mM Tris，150mM NaCl，pH 8.0，透析結(jié)束后用Ni-IDA樹脂純化。
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