[發明專利]一種脲基甲酸水解酶及其制備方法

有效

• 申請號: 201711374808.6
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN107988193B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 宮春杰;薛棟升;陶冶;胡征;楊波
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C12N9/80
• 分類號: C12N9/80;C12N15/55;C12N15/70;C12N15/11;C07K16/40;C07K16/06
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 王和平

1.一種脲基甲酸水解酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種脲基甲酸水解酶基因，其特征在于：編碼權利要求1所述的脲基甲酸水解酶；其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.包含權利要求2所述脲基甲酸水解酶基因的重組載體，其特征在于：所述載體的構建方法為：將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的脲基甲酸水解酶的編碼基因插入到質粒pET21a上的EcoRI和NdeI限制性酶切位點之間，使該核苷酸序列位于啟動子下游并受其調控，得到重組大腸桿菌BL21表達質粒pET21a-APH。

4.PCR擴增權利要求2所述脲基甲酸水解酶基因的引物序列，其特征在于：所述引物序列的正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4。

5.一種制備權利要求1所述的脲基甲酸水解酶的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的脲基甲酸水解酶的編碼基因插入到質粒pET21a上的EcoRI和NdeI限制性酶切位點之間，得到重組大腸桿菌BL21表達質粒pET21a-APH；

2)將上述重組載體轉化大腸桿菌BL21感受態，得到重組菌株Ecoli BL21-pET21a-APH；

3)將Ecoli BL21-pET21a-APH擴大培養，誘導表達脲基甲酸水解酶，收集菌體；

4)菌體破碎后，通過Ni-NTA親和層析色譜柱純化后得到純化的脲基甲酸水解酶。

6.一種制備和檢測權利要求1所述的脲基甲酸水解酶鼠來源的多克隆抗體的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)純化后的脲基甲酸水解酶注射小鼠，采集血清；

2)用步驟1)中得到的血清通過ELISA進行效價檢測；

3)步驟2)中的測得的效價符合條件，即進行抗體純化；

4)將步驟3)中純化得到的抗體與脲基甲酸水解酶的原始菌株的破碎液進行WesternBlotting檢測。