[發(fā)明專利]基于具有電催化活性的多肽模擬物的電化學(xué)生物傳感器用于乙酰膽堿酯酶檢測

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711373506.7
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN108120761B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡宇芳;張青青;徐利華;王嬌;饒家佳;郭智勇;王邃
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/30;G01N27/327;G01N1/28;G01N1/38
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本發(fā)明公開了基于具有電催化活性的多肽模擬物的電化學(xué)生物傳感器用于乙酰膽堿酯酶檢測，特點(diǎn)是具體步驟如下：(1)將硝酸銀、L?半胱氨酸和二次蒸餾水于攪拌器上劇烈攪拌混合均勻，然后振蕩器中孵育；(2)利用電化學(xué)方法將石墨烯電沉積到裸玻碳電極上，再用0.05％wt Nafion溶液與(1)所得溶液混合滴涂于GO/GCE上，得到基于具有電催化活性的多肽模擬物的電化學(xué)生物傳感器(CP/GO/GCE)；(3)乙酰膽堿酯酶活性檢測，乙酰膽堿一步催化生成H₂O₂，將乙酰膽堿、AChE和膽堿氧化酶混合均勻，孵育生成H₂O₂，(2)中制得傳感器對該溶液檢測，特異性好、靈敏度高、檢測速度快，結(jié)果準(zhǔn)確可靠；(4)AChE抑制劑馬拉硫磷檢測，將乙酰膽堿、AChE、馬拉硫磷和膽堿氧化酶混合均勻，孵育，(2)中制得傳感器對該溶液檢測，優(yōu)點(diǎn)是特異性好、靈敏度高、檢測速度快，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及電化學(xué)生物傳感器，尤其是涉及基于具有電催化活性的多肽模擬物的電化學(xué)生物傳感器的制備方法及其在乙酰膽堿酯酶檢測方面的應(yīng)用，屬于功能材料和生物傳感技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

乙酰膽堿酯酶(AChE)是一種具有羧肽酶和氨肽酶活性的膽堿酯酶，能夠選擇性的催化水解底物乙酰膽堿。它與細(xì)胞的發(fā)育和成熟有密切的關(guān)系，對神經(jīng)元的發(fā)育和神經(jīng)的再生有促進(jìn)作用。在人體內(nèi)，AChE主要分布于神經(jīng)系統(tǒng)組織中，能夠快速的催化水解神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿而導(dǎo)致神經(jīng)沖動傳遞的終止，從而使人體的正常生理功能得到保證。研究表明，AChE與細(xì)胞的發(fā)育和成熟有緊密的關(guān)系，主要表現(xiàn)在：胚胎組織中富含AChE；在原發(fā)性腫瘤組織及某些癌癥病人的血清中發(fā)現(xiàn)AChE的活性增加；AChE的誕生與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)生過程有直接關(guān)系。醫(yī)學(xué)上，AChE功能受到影響會引起精神類疾病，如：阿爾茨海默病和帕金森病等。AChE活性受有機(jī)磷農(nóng)藥的特異性抑制，故而可以成為監(jiān)控有機(jī)磷農(nóng)藥的重要的靶標(biāo)物質(zhì)。由此可見，AChE與人類健康有十分重要的關(guān)系，因此發(fā)展AChE活性的分析檢測方法有十分重要和現(xiàn)實(shí)的意義。

有機(jī)磷農(nóng)藥是人類最早合成而且至今仍在廣泛使用的一類殺蟲劑，是目前我國使用最重要的農(nóng)藥之一。有機(jī)磷農(nóng)藥與AChE結(jié)合會形成磷酰化膽堿酯酶(ChE)，磷?；疌hE很穩(wěn)定，使酶失去催化水解的能力并逐漸老化，造成乙酰膽堿(ACh)在體內(nèi)的積累，最終導(dǎo)致膽堿能神經(jīng)先興奮后抑制。高含量的有機(jī)磷農(nóng)藥可導(dǎo)致驚厥、呼吸困難、心律不齊、缺氧癥等急性中毒癥狀，低含量的有機(jī)磷農(nóng)藥亦可經(jīng)長期慢性毒害導(dǎo)致心臟、肝臟、腎和其他器官的損害?；诿敢种菩偷囊阴Ｄ憠A酯酶生物傳感用于對有機(jī)磷農(nóng)藥檢測，具有靈敏度高、分析速度快、成本低、能在復(fù)雜體系中進(jìn)行在線連續(xù)監(jiān)測等優(yōu)點(diǎn)。開發(fā)一些易于操作、價(jià)格低廉的新型乙酰膽堿酯酶生物傳感技術(shù)，用于實(shí)現(xiàn)對有機(jī)磷農(nóng)藥的高靈敏檢測仍然具有十分重要的意義。