[發明專利]基于具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器用于乙酰膽堿酯酶檢測

有效

• 申請號: 201711373506.7
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN108120761B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 胡宇芳;張青青;徐利華;王嬌;饒家佳;郭智勇;王邃
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/30;G01N27/327;G01N1/28;G01N1/38
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1.基于具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器，其特征在于該電化學生物傳感器通過以下方法構建的：

首先，利用半胱氨酸和硝酸銀合成類多肽結構的配位聚合物Cys-Ag(I)CP；然后將玻碳電極拋光洗凈，電化學方法修飾石墨烯，再將配位聚合物滴涂于電極表面，得具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器CP/GO/GCE；最后，配制含不同濃度的乙酰膽堿酯酶和馬拉硫磷反應液，檢測電化學傳感器對反應液的電化學響應。

2.如權利要求1所述的具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器，其特征是，石墨烯修飾玻碳電極的具體方法是：首先將裸玻碳電極GCE拋光清洗處理干凈，氮氣吹干；然后將石墨烯借助循環伏安法設置電位-1.5～0.5V，掃速為10mV/s電沉積到裸玻碳電極上得到穩定的石墨烯修飾電極，即GO/GCE；其中，裸玻碳電極GCE直徑為3mm。

3.如權利要求2所述的具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器，其特征是，類多肽結構的半胱氨酸-銀配位聚合物Cys-Ag(I)CP的合成具體方法為：依次移取50.0～80.0μL二次蒸餾水、5.0～30.0μL濃度為1.0～5.0mM的硝酸銀AgNO₃溶液及5.0～25.0μL濃度為1.0～4.0mM的L-半胱氨酸L-Cys溶液，攪拌器上劇烈攪拌2～5min至混合均勻，然后移至溫度為25～37℃、轉速調至150～200r/min的振蕩器中孵育8～30min；最后移至4℃冰箱避光保存備用。

4.如權利要求3所述的具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器，其特征是，傳感器的制備方法為：用移液器取1.0～4.0μL類多肽結構的半胱氨酸-銀配位聚合物Cys-Ag(I)CP的溶液與2μL 0.05％wt Nafion溶液混合滴涂于石墨烯修飾電極GO/GCE上，15～60min后，用二次蒸餾水緩緩沖洗電極，得到基于具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器CP/GO/GCE。

5.根據權利要求1～4任意一項所述的具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器在乙酰膽堿酯酶活性檢測的應用，其特征是，乙酰膽堿酯酶活性檢測的方法為：依次取0.1～5.0μL濃度為1.0～3.0M的乙酰膽堿水溶液，0.1～5.0μL濃度為10²～3×10³U/L的乙酰膽堿酯酶，0.1～5.0μL濃度為1.0×10²～4.0×10³U/L的膽堿氧化酶ChOx及100.0～500.0μL的濃度為0.1M、pH7.0的PBS至總體積為500μL；攪拌器上劇烈攪拌1～3min至混合均勻，然后移至溫度為30～37℃、轉速調至150～200r/min的振蕩器中孵育15～30min；合成一系列反應液，控制乙酰膽堿酯酶終濃度范圍為：0～1.2U/L；利用所述的具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器CP/GO/GCE對反應液進行檢測。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：利用計時電流法，設置電位為-0.3V，檢測所述的具有電催化活性的多肽模擬物的電化學生物傳感器CP/GO/GCE在濃度為0.1M、pH7.0的PBS緩沖液中對乙酰膽堿酯酶的電化學響應，根據電流響應的大小確定與乙酰膽堿酯酶濃度的關系。