[發明專利]一種苦蕎籽粒RNA的快速提取方法在審
| 申請號： | 201711372936.7 | 申請日： | 2017-12-19 |
| 公開（公告）號： | CN107841499A | 公開（公告）日： | 2018-03-27 |
| 發明（設計）人： | 王迅;張賢聰;黎媛;汪志輝;唐懿;王進 | 申請（專利權）人： | 四川農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 成都帝鵬知識產權代理事務所(普通合伙)51265 | 代理人： | 黎照西 |
| 地址： | 611130 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 籽粒 rna 快速 提取 方法 | ||
1.一種苦蕎籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)滅菌處理：對所用器皿和器具進行乙醇灼燒滅菌，并在操作前預冷；
(2)在離心管中加入65℃預熱后的CTAB提取液，然后加入β-巰基乙醇混勻，再加入研磨成粉末狀的苦蕎籽粒樣品進行劇烈混勻；所述CTAB提取液配方為：2％CTAB(W/V)，60mMTris-HCl，25mMEDTA，15％無水乙醇，pH為8.0；
(3)將離心管置于65℃水浴處理15～20min，水浴完畢后取出，于常溫下12000rpm離心5～10min；
(4)吸取步驟(3)離心后所得上清液于新管，加入等體積的配比為24:1的氯仿-異戊醇混合液，混勻1min，然后加入pH為4.6的醋酸鉀使其終濃度為1.2M，充分混勻后冰浴15min，常溫下12000rpm離心5～10min，吸取上清液于新管；
(5)向步驟(4)離心后所得上清液中加入等體積的LiCl溶液使其管內終濃度為2M，-20℃下靜置沉淀1～2h，取出于4℃下12000rpm離心10min，傾棄液體，將管底沉淀物用乙醇漂洗，短離心后晾干乙醇，向沉淀物中加入重蒸水溶解，做電泳檢測。
2.根據權利要求1所述的苦蕎籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步驟(1)中所述CTAB提取液與β-巰基乙醇的體積比為80:1。
3.根據權利要求2所述的苦蕎籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，所述CTAB提取液的加入量為800ul，所述β-巰基乙醇的加入量為10ul。
4.根據權利要求3所述的苦蕎籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步驟(1)中取新鮮或凍存的8-15粒苦蕎籽粒樣品在液氮中研磨成粉末，然后用小勺刮入離心管中。
5.根據權利要求1所述的苦蕎籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步驟(3)中在水浴過程中震蕩混勻數次。
6.根據權利要求1所述的苦蕎籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步驟(5)中將管底沉淀物先用75％乙醇漂洗一次，再用無水乙醇漂洗一次。
7.根據權利要求1所述的苦蕎籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步驟(5)中所述晾干乙醇為將倒置于吸水紙上晾干至管壁無液滴。
8.根據權利要求1所述的苦蕎籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，步驟(5)中向沉淀物中加入重蒸水15～20ul進行溶解。
9.根據權利要求1所述的苦蕎籽粒RNA的快速提取方法，其特征在于，滅菌處理中，對所用的研缽、研棒、小勺器具用1-2ml無水乙醇灼燒滅菌。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于四川農業大學，未經四川農業大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201711372936.7/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
