[發明專利]HPLC檢測馬鞭草中齊墩果酸和熊果酸的方法

在審

• 申請號: 201711369894.1
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108008046A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 張云平;陳啟釗;梁劍鋒
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種HPLC檢測馬鞭草中齊墩果酸和熊果酸的方法，包括以下步驟：(1)制備對照品溶液：取齊墩果酸和熊果酸的對照品分別用甲醇制成對照品溶液；(2)制備待測樣品溶液：取馬鞭草藥材經快速溶劑萃取，獲得的萃取液用甲醇稀釋，得到待測樣品溶液；(3)制定標準曲線：取不同濃度的齊墩果酸和熊果酸的對照品溶液混合后上高效液相色譜儀進行定量測定，分別獲得齊墩果酸和熊果酸的標準曲線；(4)測定待測樣品溶液：取待測樣品溶液上高效液相色譜儀進行定量測定，獲得齊墩果酸和熊果酸的峰面積，然后根據齊墩果酸和熊果酸的標準曲線獲得待測樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量。本發明提取效率高，檢測簡便快速。

技術領域

本發明涉及檢測馬鞭草中齊墩果酸和熊果酸方法，尤其涉及一種HPLC檢測馬鞭草中齊墩果酸和熊果酸的方法。

背景技術

齊墩果酸(oleanolic acid)和熊果酸(ursolic acid)都是五環三萜類化合物，是多種中藥材均含有的活性成分，具有保肝、消炎、抗腫瘤、調血脂、免疫雙向調解等藥理作用。其檢測的方法有分光光度法、薄層掃描和高效液相色譜法，齊墩果酸和熊果酸互為同分異構體，僅29、30位的甲基位置不同，分離存在一定困難，要將兩者分開，色譜條件的選擇非常重要，近年來采用HPLC測定的方法大多流動相組成復雜，出峰時間長，峰形和分離度不太理想。

快速溶劑萃取(ASE)是指在密閉容器內于高溫(50～200℃)和高壓(3448～20685kPa)條件下，在短時間內，用有機溶劑提取固體或半固體樣品的一種新型樣品前處理方法。與超聲、微波、回流、超臨界萃取等成熟方法相比，ASE有萃取溶劑用量少、提取時間短、萃取效率高、操作簡單方便、安全和自動化程度高等優點。國外已有學者將這項技術應用于植物藥定量和定性分析中樣品的前處理，但在中藥材有效成分的定量和定性分析中作為樣品的前處理方法應用較少。

馬鞭草又叫馬鞭梢、鐵馬鞭、白馬鞭、瘧馬鞭、鳳頸草、紫頂龍芽草、野荊芥。全草含馬鞭草苷、鞣質、揮發油，根和莖種含水蘇糖，葉種含腺苷和B—胡蘿卜素。藥性：味苦，性寒，歸肝、脾經。全草含馬鞭草甙(verbenalin)，ey 5-羥基馬鞭草甙；另含苦杏仁酶、鞣質；戟葉馬鞭草甙(hastatoside)，羽扇豆醇(lupelo)，β-谷甾醇(β-sitosterol)，熊果酸(ursolicacid)，齊墩果酸(oleanolic acid)，桃葉珊瑚甙(aucubin)，蒿黃素(artemetin)。葉中含馬鞭草新甙(verbascoside)，腺甙(adenosine)，β-胡蘿卜素(β-carotenne)。根和莖中含水蘇糖(stachyose)。《中國藥典》2015年版記載了馬鞭草的成分測定方法，但是其提取時間長，為300min，藥典方法使用C18色譜柱，分析時間為35～65min，使用緩沖鹽或三乙胺，試劑配制過程繁瑣。

發明內容

本發明的目的旨在提供一種HPLC檢測馬鞭草中齊墩果酸和熊果酸的方法。

本發明的目的通過以下技術方案來實現：一種HPLC檢測馬鞭草中齊墩果酸和熊果酸的方法，包括以下步驟：

(1)制備對照品溶液：取齊墩果酸和熊果酸的對照品分別用甲醇制成對照品溶液；

(2)制備待測樣品溶液：取馬鞭草藥材經快速溶劑萃取，獲得的萃取液用甲醇稀釋，得到待測樣品溶液；

(3)制定標準曲線：取不同濃度的齊墩果酸和熊果酸的對照品溶液混合后上高效液相色譜儀進行定量測定，分別獲得齊墩果酸和熊果酸的標準曲線；

(4)測定待測樣品溶液：取待測樣品溶液上高效液相色譜儀進行定量測定，獲得齊墩果酸和熊果酸的峰面積，然后根據齊墩果酸和熊果酸的標準曲線獲得待測樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量。