[發明專利]一種雙酚類化合物的分子印跡固相萃取?高效液相色譜?串聯質譜測定方法

在審

• 申請號: 201711367737.7
• 申請日: 2017-12-18
• 公開（公告）號: CN107907614A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 孫曉麗;王慕華;楊羅星;王婷;郭顯富
• 申請（專利權）人: 麗水學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙)33213
• 代理人: 張健

技術領域

本發明涉及一種雙酚類化合物的分子印跡固相萃取-高效液相色譜-串聯質譜測定方法和應用，屬于環境有機污染物分離分析領域。

背景技術

雙酚A(BPA)是目前使用最廣泛的化合物之一，全球的年產量在80億英鎊左右。BPA是聚碳酸酯、環氧樹脂和酚醛樹脂生產過程中的原料或添加劑，也是外科修補術中抗氧化和穩定化處理的重要材料，在食品包裝和容器內壁涂裝中也被廣泛使用。材料的生產、制造、使用過程中的溶出都有可能釋放出BPA，并通過大氣或污水進入環境。研究表明BPA在環境，食品和人體樣品中廣泛存在，美國90％的普通人尿樣中都檢出了BPA。BPA具有基因誘變性和雌激素干擾作用，微量甚至痕量的濃度也可能對動物生理狀況、生殖系統以及胎兒發育等造成不良影響，是一種環境內分泌干擾物(EDCs)。BPA已經被美國和歐盟一些國家和地區作為重點列入優先控制污染物的黑名單。伴隨法規對于BPA使用的限制，雙酚S(BPS)、雙酚F(BPF)、雙酚 E(BPE)、雙酚B(BPB)、雙酚AF(BPAF)、雙酚AP(BPAP)和雙酚Z(BPZ)等作為BPA的主要替代物被越來越多的使用，其毒性和雌激素效應與雙酚A相似。介于雙酚類對于人體的潛在毒性，對環境中雙酚類物質含量的評估是必要的，可以為風險控制提供可靠的參考數據。

低濃度和基質復雜是限制雙酚類物質分析檢測的瓶頸。雙酚類在環境中的存在濃度很低，一般都在ng L^-1或ng g^-1級，需要較高的樣品富集倍數和高靈敏的質譜檢測。其中，固相萃取-高效液相色譜-串聯質譜檢測(SPE-HPLC-MS/MS)是近年來發展的最有潛力的雙酚類化合物檢測方法。常用于雙酚類富集的固相萃取材料有HLB、C18 和MCX等，但均存在選擇性低、雜質去除能力差的缺點，未去除的樣品基質和雜質會在液相色譜分離過程中與雙酚類物質共餾出，一起進入電噴霧電離源，進而影響雙酚類化合物的電離效率，表現為電離增強或抑制效應，影響分析方法的準確性和重現性。

近年來發展的替代模板分子印跡固相萃取(DMISPE)技術，可以在保留分子印跡材料對目標分子識別選擇性的同時，有效地避免其因模板泄漏而造成的分析結果不準確問題，具有很高的選擇性和可靠性。本發明所使用的雙酚類化合物分子印跡固相萃取材料采用1,1,1- 三(4-羥基苯基)乙烷(THPE)作為替代模板，對雙酚類化合物具有超高的類選擇性(ZL 2013 1 0334888.8)。將替代模板分子印跡固相萃取與LC-MS/MS相結合可以同時獲得低的基質效應和高的檢測靈敏度，克服現有技術的不足。本發明采用雙酚類化合物替代模板印跡材料作為固相萃取填料結合HPLC-MS/MS建立環境樣品中9種雙酚類內分泌干擾物的高效分離檢測方法，具有非常高的科研和實用價值。

發明內容

針對現有技術不足，本發明提供一種雙酚類化合物替代模板分子印跡固相萃取-高效液相色譜-串聯質譜測定方法用于環境樣品中痕量雙酚類內分泌干擾物的檢測。

為實現上述目的，本發明公開了一種雙酚類化合物分子印跡固相萃取-高效液相色譜-串聯質譜測定方法，所述方法的測定步驟如下：

(1)樣品的采集與保存

采集的水樣放置于棕色玻璃瓶中，污泥或底泥樣品置于不銹鋼飯盒中。樣品采集后，在現場加入甲醛(1％,v/v)去除生物活性，冷藏運輸。樣品運抵實驗室后，水樣采用玻璃纖維濾膜過濾，并在-20℃保存待用。污泥、底泥或土壤樣品經冷凍干燥后，過60目篩，并于 -20℃保存待用。

(2)水樣的富集和凈化

水樣采用氫氧化鈉調節至pH 9.0，加入BPA-¹³C₁₂和TBBPA-¹³C₁₂同位素內標后加載至雙酚類化合物專用的分子印跡固相萃取柱管。分子印跡固相萃取柱預先采用3mL乙腈和3mL水活化。水樣的上樣量為10-1000mL，完成上樣后，對固相萃取柱真空抽干10-30min。然后采用3mL乙腈淋洗，最后用12.0mL甲醇或6mL甲醇-三氟乙酸(98:2,v/v)洗脫。洗脫液采用氮吹濃縮至近干，并采用甲醇-水 (50:50,v/v)定容至1mL。定容后樣品用于HPLC-MS/MS分析，進樣量為10μL。

(3)污泥、底泥或土壤樣品的提取與凈化