[發(fā)明專利]一種鑒定滸苔近緣種的引物對、DNA條形碼及其應用和檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711365182.2 | 申請日： | 2017-12-18 |
| 公開（公告）號： | CN107988408B | 公開（公告）日： | 2021-08-03 |
| 發(fā)明（設計）人： | 高大海;孫忠民;姚建亭 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學院海洋研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 李穎;周秀梅 |
| 地址： | 266071 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鑒定 近緣 引物 dna 條形碼 及其 應用 檢測 方法 | ||
1.一種鑒定滸苔近緣種的DNA條形碼，其特征在于：DNA條形碼為葉綠體rps7-ycf3序列；所述序列由用于鑒定滸苔(U.prolifera)的DNA條形碼，為SEQ ID No.3所示的堿基序列；用于鑒定緣管滸苔(U.linza)的DNA條形碼，為SEQ ID No.4所示的堿基序列；和，用于鑒定曲滸苔(U.flexuosa)的DNA條形碼，為SEQ ID No.5所示的堿基序列組成。
2.按權(quán)利要求1所述的鑒定滸苔近緣種的DNA條形碼的應用，其特征在于：所述DNA條形碼對在鑒定滸苔近緣種中的應用。
3.一種鑒定滸苔近緣種的方法，其特征在于：
1)以待測樣品的DNA為模板，以鑒定所述滸苔近緣種的引物對作為引物，進行PCR擴增；
2)將上述擴增獲得產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測，在595±20bp存在條帶，葉綠體rps7-ycf3序列，即為滸苔近緣種，將其進一步測序分析；
3)將在595±20bp存在條帶的擴增產(chǎn)物與所述SEQ ID No.3-5所示的DNA條形碼進行堿基序列對比，擴增產(chǎn)物與所述SEQ ID No.3-5任意一條所示的DNA條形碼的同源性在99.5％以上，即待測的物種來自于所述DNA條形碼對應的物種。
4.按權(quán)利要求3所述鑒定滸苔近緣種的方法，其特征在于：
所述25μL PCR體系為：
所述PCR條件為：預變性94℃、5min；94℃變性30s,55℃退火40s,72℃延伸40s,35個循環(huán)；最后72℃延伸10min。
5.按權(quán)利要求3所述鑒定滸苔近緣種的方法，其特征在于：
上游引物序列：5’GCTGACATACCATCACGATAGT 3’(SEQ ID U01)；
下游引物序列：5’CGTATTATTTCACCAGACCCTT 3’(SEQ ID U02)。
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