[發明專利]一種發酵法生產高分子量透明質酸的方法

有效

• 申請號: 201711363083.0
• 申請日: 2017-12-09
• 公開（公告）號: CN108410927B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 李學朋;魏璐;包鑫;張宗華;崔國梁;劉元濤;楊瑞麗
• 申請（專利權）人: 新疆阜豐生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12R1/46
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于透明質酸生物發酵領域，公開了一種發酵法生產高分子量透明質酸的方法，其包括以下步驟：步驟1)菌株活化，步驟2)發酵，步驟3)過濾、醇沉、離心以及干燥。本發明方法簡單可行，生產的透明質酸產量和分子量高，外觀潔白透亮，達到化妝品級產品的要求。

技術領域

本發明屬于透明質酸生物發酵領域，具體涉及一種發酵法生產高分子量透明質酸的方法。

背景技術

透明質酸(hyaluronic acid，HA)化學名稱為糖醛(玻璃)酸，它是以D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖單體為結構單元，通過β-1，4糖苷鍵反復交替連接而形成的鏈狀高分子酸性粘多糖。HA通常溶于水，不溶于醇、酮、乙醚等有機溶劑，具有保濕、抗衰老、潤滑等功能，廣泛用于日化、保健食品、醫藥等領域；如在醫藥領域，HA在藥物中可作為藥物載體可將各類藥物靶向送至病理部位，具有促進骨折愈合及一定抗癌作用等功效。

透明質酸鈉產品因其分子量的不同而體現出不同的生物特性。

(1)大分子透明質酸(分子量范圍180萬～260萬)可在皮膚表面形成一層透氣的薄膜，使皮膚光滑濕潤，并可阻隔外來細菌、灰塵、紫外線的侵入，保護皮膚免受侵害。

(2)中分子透明質酸(分子量范圍100萬～180萬)可以緊致肌膚，長久保濕。

(3)小分子透明質酸(分子量范圍40萬～100萬)能滲入真皮，具有輕微擴張毛細血管，增加血液循環、改善中間代謝、促進皮膚營養吸收作用，具有較強的消皺功能，可增加皮膚彈性，延緩皮膚衰老。相對于中小分子量的透明質酸來說，高分子量透明質酸對肌膚的保護作用更大，更適用于化妝品及美容行業，市場前景廣闊。

透明質酸的生產方法主要包括動物來源的透明質酸提取和發酵法制備透明質酸；相較于動物提取，發酵法具有不受原料來源限制、工藝簡便、易形成生產規模并且無病毒交叉感染的風險，更為重要的是，該方法大大降低了生產成本，使透明質酸的應用范圍得到了極大地推廣。

申請人之前的專利技術CN105368912A采用兩菌株混合發酵，大大提高了發酵效率，但是該方法對培養條件要求較高，可能導致不能形成優勢菌株，而且產生的透明質酸包括小、中、大三種分子量的透明質酸，不能形成純度較高的單一產品，降低了產品附加值。高分子透明質酸的產生與發酵培養基類型、發酵條件以及菌株細胞通透性等條件的影響。如何提高高分子透明質酸的產率以及純度是我們需要解決的技術問題。

發明內容

為了克服現有技術存在的缺陷，本發明提供了一種發酵法生產高分子量透明質酸的方法。

本發明是通過如下技術方案來實現的：

一種發酵法生產高分子量透明質酸的方法，其包括以下步驟：步驟1)菌株活化，步驟2) 發酵，步驟3)過濾、醇沉、離心以及干燥。

具體地，

所述方法包括如下步驟：

步驟1)菌株活化：將獸疫鏈球菌取出，接種于活化培養基進行活化；

步驟2)發酵：將活化好的菌種接種于發酵罐中進行發酵，發酵溫度為39-40℃，溶氧為 3.1L/min；發酵至6-7h，往發酵罐中添加甘油；發酵至14-15h，超聲處理，然后繼續發酵 2h，終止發酵；發酵過程中，通過流加蔗糖溶液將殘糖濃度控制在不低于30g/L；

步驟3)過濾、醇沉、離心以及干燥：利用板框過濾去除菌體，得到上清液，向上清液中加入2-3倍體積的無水乙醇進行沉淀90-120min，收集沉淀得到濕物料；將濕物料進行離心、真空冷凍干燥、粉碎得高分子量透明質酸。

優選地，

所述甘油在發酵罐中的濃度為200-300mg/L。

優選地，