[發明專利]一種鯡魚硫酸魚精蛋白的制備方法

在審

• 申請號: 201711358481.3
• 申請日: 2017-12-17
• 公開（公告）號: CN109929022A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 劉乃山;夏襯來;于曉娜
• 申請（專利權）人: 青島冠龍生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C07K1/14;C07K1/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種鯡魚硫酸魚精蛋白的制備方法，該方法通過以下工藝步驟：預處理、硫酸酸解提取、低溫析出、凝膠過濾層析、脫水、凍干，從鯡魚中提取純化硫酸魚精蛋白。本發明對硫酸魚精蛋白的生產工藝進行不斷改進，特別是對各工藝參數進行反復的實驗研究，不斷優化，最終確立了一套更為科學的規模化生產工藝。本發明所述的制備方法，產品質量高，所得的硫酸魚精蛋白每mg所中和的肝素抗血凝作用高達150單位,含量高達95%以上，色譜純度95%以上，其他各項指標均符合中國藥典、美國藥典、歐洲藥典標準。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說涉及一種鯡魚硫酸魚精蛋白的制備方法。

背景技術

魚精蛋白是一種多聚陽離子肽，主要存在于鳥類、魚類和哺乳動物的精巢組織中。它是一種堿性蛋白質，與ＤＮＡ結合在一起，以核精蛋白的形式存在。魚精蛋白的分子量較小，分子量主要在5.5到13.0kDa之間，由３０-５０個氨基酸組成。魚精蛋白具有很好的穩定性，加熱不易凝固，等電點在12-13之間。目前已經成功地從各種海水魚、淡水魚和哺乳動物成熟精巢組織中提取出魚精蛋白。

自1937 年McClean等報道了魚精蛋白具有抑菌活性以來，作為化學防腐劑的替代品逐漸出現在食品添加劑行列。如今，魚精蛋白在食品工業中得到了越來越廣泛的應用。與化學合成防腐劑相比，魚精蛋白具有安全性高、防腐性能好、熱穩定性高等優點，而且魚精蛋白還具有很高的營養性和功能性，能降血壓、助呼吸、促消化、抑腫瘤、抗血栓、強化肝功能、抑制血液凝固等。在醫學領域里，魚精蛋白也得到了廣泛應用，它可延遲或阻止胰島素釋放，或作為肝素解毒劑等。

目前魚精蛋白的提取, 從溶劑的采用上, 基本上是以硫酸或鹽酸為主要提取劑,以檸檬酸鹽或有機溶劑為純化劑進行純化, 也有在硫酸或鹽酸抽出液中不用有機溶劑而用聚磷酸鹽, 使魚精蛋白以磷酸鹽形式沉淀出來, 然后溶解在高濃度的硫酸按中, 復分解為精蛋白硫酸鹽。此外, 還可采用有機溶劑( 丙酮、乙醇、氯仿等) 進行反復脫水、脫脂、抽提、洗滌魚精蛋白,其間輔以硫酸鈉、氨水、過氧化氫、EDTA 二鈉鹽等試劑。

但上述方法提取的硫酸魚精蛋白含非功能性雜蛋白較多，各國藥典對硫酸魚精蛋白的純度方面都都有較高要求，尤其美國藥典在硫酸魚精蛋白的含量、生物效價、殘留溶劑、色譜純度、元素雜質、鐵含量、甲基汞含量等方面都做出了要求。因此，如何對魚精蛋白進行純化，成為目前魚精蛋白純化中亟待解決的問題。

發明內容

本發明提供了一種從鯡魚中提取硫酸魚精蛋白的方法，主要解決現有技術中魚精蛋白純度低的問題。

為了實現上述發明目的，本發明公開了一種硫酸魚精蛋白的純化工藝，包括以下步驟：

（1）預處理：取冷凍的鯡魚魚白解凍，按魚白與純化水的質量比為 (1～5)：1的比例加入冷水后置于組織搗碎機中搗碎，用四層紗布過濾得漿液；

（2）硫酸酸解：向上述漿液中加入0.3%～1.0%硫酸溶液，漿液與體積比為1: (5～15),酸解1~3h,5100хg離心20~30分鐘；收集上清液，用30%~40%NaOH溶液調節pH至8~10,5100хg離心20~30分鐘；

（3）低溫析出：收集上清液，0~4℃，靜置12~16h，傾去上層清液，向下層沉淀物按1：（3~10）（w/v）的比例加入50~70℃的水溶解；

（4）凝膠過濾層析：將上述溶液上樣于Sephadex G-25 凝膠柱，用pH 7.0～9.0 含0.01～0.20mol/L KCl 的Tris-HCl 緩沖液平衡，紫外檢測儀檢測并記錄，洗脫酶活性峰；

（5）脫水：固體用無水乙醇脫水兩次，離心，棄去上清液，留取沉淀物；

（6）凍干：將上述沉淀物裝入盤進凍干機，凍干即得硫酸魚精蛋白