[發(fā)明專利]昆蟲細胞表達PSP為校準品的檢測PSP試劑盒

有效

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• 申請日: 2018-03-05
• 公開（公告）號: CN108181472B
• 公開（公告）日: 2020-07-21
• 發(fā)明（設計）人: 張蕾;李寶民;劉斌;王珺楠;史永豐;王賀;王玉華;隋寶真;趙青;劉思言;張金玲;黃景林;關恒;林林;朱道林;仇淑園;孫玉峰;張超
• 申請（專利權）人: 吉林大學;長春恒曉生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/96;C07K14/47;C12N15/12;C12N15/866
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 白冬冬

一種昆蟲細胞表達PSP為校準品的檢測PSP試劑盒，屬于生物技術領域。本發(fā)明公開了用昆蟲細胞表達胰石蛋白，純化出PSP作為校準品，建立側向免疫層析法試紙條，時間分辨熒光法測定試紙條熒光強度，檢測血液或液體中PSP濃度過程，此方法步驟如下：提取胃癌細胞(AGS)中RNA，合成cDNA，重組Flag?PSP AcNPV質粒轉入此昆蟲細胞，純化PSP蛋白，作為校準品，標記羧基修飾微粒上，組裝成側向免疫層析法試紙條，建立PSP濃度自動顯示系統。本發(fā)明優(yōu)點是靈敏度高、特異性強、操作簡便、用于快速診斷細菌感染和膿毒血癥發(fā)生。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域。

背景技術

危重病人常發(fā)生細菌感染，膿毒血癥、膿毒性休克、及多種器官衰竭，導致病人死亡，需要快速、準確判定細菌感染及膿毒血癥發(fā)生、發(fā)展，進行及時有效的治療。臨床上常用測定血清中降鈣素原（Procalcitonin,PCT）和C反應蛋白（C-reactive protein,CRP）指標來判定細菌感染及膿毒血癥發(fā)生及嚴重程度。

血清中CRP水平可反應機體炎癥的嚴重程度，CRP作為一種應急反應蛋白，病毒感染，細菌感染，及機體炎癥反應均可引起CRP的升高，單靠這一指標很難區(qū)分感染性疾病和其它炎性疾病，特異性較弱。

而PCT作為常用炎癥指標，對診斷細菌感染發(fā)生特異性較強，測定血清中PCT濃度對感染前期及膿毒血癥診斷，鑒別感染類型和感染程度，在臨床上有很高的指導意義。但有研究發(fā)現，部分手術后無感染病人，創(chuàng)傷病人PCT水平增高；而一些細菌感染早期，PCT 水平不增高，表明PCT不能作為判定細菌感染，膿毒血癥發(fā)生的唯一指標，需尋找新細菌感染指標。

近年來研究發(fā)現，血液中胰石蛋白（(Pancreatic stone protein,PSP)水平增高能早期判定細菌感染、膿毒癥發(fā)生、評估膿毒癥患者的嚴重程度，是預測患者病死率的可靠指標，其價值優(yōu)于PCT、CRP、IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、可溶性CD25等細菌感染指標，PSP將成為早期診斷細菌感染和膿毒癥新標志物。

PSP是在慢性鈣化性胰腺炎病人胰腺結石和胰液中提取出一種蛋白，又稱胰島再生源蛋白(Regenerating islet-derived protein,Reg)，由再生基因(Regeneratinggene)編碼16KDa蛋白,該蛋白屬于C-類凝集素(C-type lectin)家族。PSP主要由胰腺的腺泡細胞產生和分泌，在胃、腸道等處細胞也分泌少量PSP。開始研究認為，PSP有抑制胰腺結石形成的作用，但現在研究發(fā)現，PSP能抑制炎癥反應、促進細胞增殖、抗細胞凋亡、調節(jié)細胞黏附、促細菌聚集等作用，PSP還能作為一種抗菌蛋白, 控制腸道菌群的擴散和防止病原菌感染腸道。PSP被認為是一種急性期反應蛋白，受到IL-6、 TNF-α等炎癥因子及感染期間釋放的細胞因子的調節(jié)。PSP也屬于炎性因子，可誘導中性粒細胞中L-選擇素的脫落和下調β2整合素表達， 激活中性粒細胞， 因此， PSP是一種炎癥和感染發(fā)生的標記物。研究表明，急性、慢性胰腺炎發(fā)生時，上調PSP表達；而全身性應激反應，在缺乏任何胰腺炎癥情況下，也促進胰腺PSP表達和分泌增多，說明PSP也是全身性應激反應標記物。

研究發(fā)現，無胰腺損傷患者，住院過程中發(fā)生膿毒癥患者血清中PSP水平（146ng/ml）高于局部細菌感染患者(111ng/ml)，而局部細菌感染患者PSP水平高于無感染患者(22ng/ml)；PSP水平增高與中性粒細胞上CD11b、CD62L的表達密切相關，表明PSP結合并激活中性粒細胞，血液中PSP水平增高代表早期細菌感染發(fā)生。