[發明專利]一種高純度多殺菌素的提取方法

在審

• 申請號: 201711357879.5
• 申請日: 2017-12-17
• 公開（公告）號: CN109929004A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 聞建華;傅紅
• 申請（專利權）人: 天津領世生物科技開發有限公司
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種高純度多殺菌素的提取方法，包括以下步驟1.硅藻土混均發酵液，NaOH調pH11.5；2.壓濾收集菌體，85%溶劑溶解HCL調pH3.5；3.壓濾，水稀釋溶劑溶度60%，樹脂吸附；4.75%溶劑將樹脂吸附的多糖蛋白等雜質洗脫，用90%溶劑將樹脂中吸附的多殺菌素解析，真空濃縮；5.NaOH調pH=11，使多殺菌素沉淀，過濾，用稀堿液洗滌多殺菌素1~3次，真空干燥，得90%以上粗品；6.用水溶解粗品磷酸調pH至5.0上柱洗脫，收98%多殺菌素，真空脫除溶劑，高碳醇萃取多殺菌素有機相；7.有機相加水反向萃取多殺菌素，反萃取相旋蒸，濃縮物置凍干機干燥得98%多殺菌素。本發明產品純度高，滿足特殊用途研究。

技術領域

本發明涉及一種從發酵液中提取精制抗生素的方法，特別是涉及一種高純度多殺菌素的提取方法。

背景技術

多殺菌素(spinosad，spinosyns)又名刺糖菌素、多殺霉素，是自土壤樣品中分離的放線菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)經有氧發酵產生的次級代謝產物，屬大環內酯類抗生素，分子結構中含有一個二十二元內酯環、一個鼠李糖及一個福樂糖胺，在水中溶解度很小，易溶于醇類、酯類等多種極性、非極性有機溶劑。經有氧發酵后刺糖多孢菌發酵液中主要含有多殺菌素A(85~90%)、D(10~15%)兩種殺蟲活性成分，同時還會含有少量B、C、E、F、H、J、K、L等多種結構類似組分。多殺菌素對磷翅目(Lepidoptera)、雙翅目(Diptera)、鞘翅目(Coleoptera)、纓翅目(Thysanoptera)、膜翅目(Hymenoptera)、等翅目(Isoptera)等多種農業害蟲均有很強的毒殺作用，其選擇毒性遠高于其他常用的化學農藥、生物農藥，顯著高于DDT、氯氰菊酯和阿維菌素，而對哺乳類、魚類、兩棲類等的毒性極低，具有毒力高、殺蟲譜廣、非靶標毒性低、對環境安全等優點，已廣泛應用于棉花、茶葉、蔬菜等多種農作物及果樹害蟲防治。目前，含多殺菌素的農藥產品由美國陶氏農業科學公司生產。我國有48%懸浮液(商品名：Tracer，催殺)和2.5%懸浮液(商品名：Success，菜喜)兩種產品銷售，分別應用于小菜蛾和棉鈴蟲等害蟲的防治。

多殺菌素的殺蟲作用機制新穎獨特。研究表明，其主要是作用于煙堿型乙酰膽堿受體(nicotinic acetylcholine receptor, nAchR)和γ-氨基丁酸受體(gamma-aminobutyric acid receptor, GABAR)，導致蟲體神經細胞超活化以及非功能性的肌肉收縮、衰竭，并伴隨顫抖和麻痹，迄今沒有發現與其他殺蟲劑有交叉抗性。

作為一種高效綠色生物農藥，多殺菌素的應用前景非常廣闊。但是，關于多殺菌素制備工藝的研究，尚沒有形成高效、高得率的工業生產技術，在多殺菌素提取制備、純化方法等方面的研究也極少。美國專利U.S.P 5227295公開了一種從刺糖多孢菌發酵液中分離多殺菌素（文中稱為A83543）的方法：向發酵液中加入等體積的丙酮并充分浸取，過濾后，濾液用NaOH溶液調pH至13，然后上HP-20ss吸附樹脂，以甲醇:乙腈＝1:1(含0.1%乙酸鈉)溶液0%~95%梯度洗脫多殺菌素A和D組分，利用HPLC進行跟蹤檢測，并分段收集洗脫液，將多殺菌素洗脫液濃縮后將其用石油醚稀釋，稀釋液上硅膠層析柱，用石油醚和甲醇梯度洗脫，利用HPLC跟蹤檢測，分段收集洗脫液，分別得到多殺菌素A和D的洗脫液。