[發(fā)明專利]一種檢測(cè)牡丹葉片中類黃酮成分的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711356006.2
• 申請(qǐng)日: 2017-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN108088926B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛璟祺;楊德順;張秀新;劉永森;鄭姝寧;王順利;孫青文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所;城發(fā)投資集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 北京格允知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11609
• 代理人: 譚輝;李亞東

1.一種檢測(cè)牡丹葉片中類黃酮成分的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)類黃酮提取液的制備：將牡丹葉片在冷凍條件下研磨成牡丹葉片粉末，用醇溶液混勻所述牡丹葉片粉末，得到含有牡丹葉片的混合料，然后將所述混合料依次進(jìn)行超聲處理和離心處理，收集上清液并去除沉淀，再將收集的所述上清液通過濾膜過濾除去固體雜質(zhì)，得到類黃酮提取液；

(2)超高效液相色譜儀的色譜條件、三重四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀的質(zhì)譜條件以及二極管陣列檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)的設(shè)置；所述色譜條件為：流動(dòng)相：溶劑A為含有0.1％～0.3％體積甲酸的乙腈與水的混合溶液，其中水與乙腈的體積比為(90～95):(10～5)，溶劑B為含有0.1％～0.3％體積甲酸的乙腈溶液；流速為0.2～0.3mL/min；色譜柱溫度為30～40℃；進(jìn)樣量為2～4μL；梯度洗脫條件：0～22min，100％溶劑A～72％溶劑A，0％溶劑B～28％溶劑B；22～22.5min，72％溶劑A～60％溶劑A，28％溶劑B～40％溶劑B；22.5～23min，60％溶劑A～0％溶劑A，40％溶劑B～100％溶劑B；23～26.5min，0％溶劑A，100％溶劑B；26.5～27min，0％溶劑A～100％溶劑A，100％溶劑B～0％溶劑B；27～32min，100％溶劑A，0％溶劑B；所述質(zhì)譜條件為：離子源溫度為500～600℃，采用負(fù)離子掃描方式；噴霧電壓為負(fù)壓4000V～負(fù)壓5000V，去簇電壓為負(fù)壓70V～負(fù)壓90V；霧化氣壓力為0.3～0.4MPa，輔助霧化氣壓力為0.3～0.4MPa，氣簾氣壓力為0.2～0.3MPa；采用飛行時(shí)間質(zhì)譜全掃描-信息關(guān)聯(lián)采集-子離子掃描模式，子離子掃描中碰撞電壓為負(fù)壓30eV～負(fù)壓40eV，碰撞電壓差為15～20eV；

(3)采用超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-三重四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)類黃酮提取液進(jìn)行檢測(cè)，獲得檢測(cè)結(jié)果；和

(4)通過分析步驟(3)中獲得的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)類黃酮物質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，推測(cè)類黃酮化合物的結(jié)構(gòu)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括通過與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和公開數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比，進(jìn)一步確證步驟(4)中推測(cè)的類黃酮化合物的結(jié)構(gòu)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法進(jìn)一步還包括采用峰面積歸一法計(jì)算牡丹葉片中類黃酮各成分的相對(duì)含量。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，三重四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀的質(zhì)量誤差限定范圍設(shè)置為小于5ppm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為310～350nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

所述牡丹葉片用量為250～350mg；和/或

所述醇溶液為甲醇溶液，所述甲醇溶液的體積濃度為80％～90％，含有0.1％～0.3％體積甲酸，用量為900～1000μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

步驟(1)中所述超聲的時(shí)間為20～30min；

步驟(1)中所述離心的速度為11000～13000r/min；

步驟(1)中所述離心的時(shí)間為10～20min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中所述濾膜為直徑0.22μm的有機(jī)濾膜。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述類黃酮成分包含14種黃酮、29種黃酮醇和2種黃烷酮。