[發(fā)明專利]一種檢測(cè)牡丹葉片中類黃酮成分的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711356006.2
• 申請(qǐng)日: 2017-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN108088926B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛璟祺;楊德順;張秀新;劉永森;鄭姝寧;王順利;孫青文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所;城發(fā)投資集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 北京格允知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11609
• 代理人: 譚輝;李亞東

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)牡丹葉片中類黃酮成分的方法，所述方法包括如下步驟：類黃酮提取液的制備；色譜條件、質(zhì)譜條件以及二極管陣列檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)的設(shè)置；采用超高效液相色譜?二極管陣列檢測(cè)器?三重四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)類黃酮提取液進(jìn)行檢測(cè)，獲得檢測(cè)結(jié)果；通過分析檢測(cè)結(jié)果，對(duì)類黃酮物質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，推測(cè)類黃酮化合物的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明方法操作步驟簡(jiǎn)單，檢測(cè)快速，精確度及靈敏度高，可檢測(cè)出含量極微的類黃酮成分，鑒定種類全面，在牡丹葉片中共鑒定出45種主要的黃酮、黃酮醇、黃烷酮和黃烷醇類化合物，填補(bǔ)了牡丹葉片中類黃酮成分鑒定的空白，對(duì)不同品種的牡丹葉片營(yíng)養(yǎng)成分的分析具有重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種牡丹葉片成分的研究方法，尤其涉及一種利用超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-三重四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)牡丹葉片中類黃酮成分的方法。

背景技術(shù)

類黃酮是指基本母核為2-苯基色原酮類化合物，即兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)通過中央三碳原子相互連接的一系列化合物。依據(jù)類黃酮基本分子結(jié)構(gòu)和雜氧環(huán)和構(gòu)象的不同，一般把類黃酮分為六類：黃酮、黃酮醇、異黃酮、黃烷酮、黃烷醇和花青素。類黃酮又稱生物類黃酮，是人類飲食中含量最豐富的一類多酚化合物，廣泛存在于蔬菜、水果、茶葉、葡萄和牡丹當(dāng)中。相關(guān)研究表明，類黃酮例如芹菜素對(duì)乳腺癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤都有很好抑制作用；木犀草素具有抗過敏、抗氧化、抗癌、抗糖尿病等良好的效果；槲皮素具有良好的藥用療效，可以有效地抑制祛痰、止咳和平喘的作用，還能有效的降低血壓、血脂、增強(qiáng)抵抗力，尤其對(duì)冠心病和高血壓患者有輔助治療的作用。

牡丹是世界著名花卉，不僅具有極高的觀賞價(jià)值，而且還具有極高的藥用價(jià)值和食用價(jià)值。現(xiàn)有技術(shù)中，對(duì)牡丹花瓣的營(yíng)養(yǎng)成分和含量進(jìn)行研究的比較多，曾有人利用超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器(UPLC-PDA)和超高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-Q-TOF-MS)對(duì)7種牡丹花瓣中類黃酮組分進(jìn)行了定性和定量分析，但是該方法僅僅涉及牡丹花瓣中類黃酮成分的檢測(cè)，且檢測(cè)牡丹花瓣類黃酮成分時(shí)，類黃酮用量多但靈敏度不夠，僅檢測(cè)到了牡丹花瓣中15種類黃酮組分。(參見：張寶智,胡永紅,韓繼剛,等.七個(gè)江南牡丹品種花瓣中類黃酮物質(zhì)分析[J].北方園藝,2013(2):61-65.)

但是，目前，對(duì)牡丹葉片中類黃酮成分分析還比較少，牡丹葉片中許多珍貴的成分通過未能檢測(cè)出來，能夠最全面檢測(cè)出牡丹葉片中類黃酮成分的方法還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是獲得一種操作方便、精確度高、靈敏度高、檢測(cè)種類全面的有效檢測(cè)牡丹葉片中類黃酮成分的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的如上所述的一個(gè)或者多個(gè)問題。

本發(fā)明提供了一種檢測(cè)牡丹葉片中類黃酮成分的方法，所述方法包括如下步驟：

(1)類黃酮提取液的制備：將牡丹葉片在冷凍條件下研磨成牡丹葉片粉末，用醇溶液混勻所述牡丹葉片粉末，得到含有牡丹葉片的混合料，然后將所述混合料依次進(jìn)行超聲處理和離心處理，收集上清液并去除沉淀，再將收集的所述上清液通過濾膜過濾除去固體雜質(zhì)，得到類黃酮提取液；

(2)超高效液相色譜儀的色譜條件、三重四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀的質(zhì)譜條件以及二極管陣列檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)的設(shè)置；

(3)采用超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-三重四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)類黃酮提取液進(jìn)行檢測(cè)，獲得檢測(cè)結(jié)果；和

(4)通過分析步驟(3)中獲得的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)類黃酮物質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，推測(cè)類黃酮化合物的結(jié)構(gòu)。

優(yōu)選地，所述方法還包括通過與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和公開數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比，進(jìn)一步確證步驟(4)中推測(cè)的類黃酮化合物的結(jié)構(gòu)。

優(yōu)選地，所述方法進(jìn)一步還包括采用峰面積歸一法計(jì)算牡丹葉片中類黃酮各成分的相對(duì)含量。