[發(fā)明專利]一種CAR-T細(xì)胞的檢測(cè)探針及其檢測(cè)方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711353354.4
• 申請(qǐng)日: 2017-12-15
• 公開（公告）號(hào): CN108088783A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鵬;湯朝陽(yáng);陳冬梅;秦樂;王翠花;梁秋彬;林思妙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南昭泰涌仁醫(yī)療創(chuàng)新有限公司
• 主分類號(hào): G01N15/14
• 分類號(hào): G01N15/14;G01N21/64
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種檢測(cè)CAR-T細(xì)胞的探針，其特征在于，所述探針包括能夠結(jié)合CAR-T細(xì)胞的配體，所述配體上修飾有量子點(diǎn)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的探針，其特征在于，所述配體包括第一配體和第二配體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的探針，其特征在于，所述第一配體能夠結(jié)合在嵌合抗原受體的scFv結(jié)構(gòu)域上，優(yōu)選為能夠結(jié)合在scFv結(jié)構(gòu)域的重鏈和/或輕鏈上；

優(yōu)選地，所述第一配體為蛋白A、蛋白G或蛋白L中的任意一種或至少兩種的組合；

優(yōu)選地，所述第一配體還修飾有生物素；

優(yōu)選地，所述第二配體能夠識(shí)別所述第一配體的生物素；

優(yōu)選地，所述第二配體為鏈霉親和素；

優(yōu)選地，所述第二配體還修飾有量子點(diǎn)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的探針，其特征在于，所述量子點(diǎn)包括硅量子點(diǎn)、鍺量子點(diǎn)、硫化鎘量子點(diǎn)、硒化鎘量子點(diǎn)、碲化鎘量子點(diǎn)、硒化鋅量子點(diǎn)、硫化鉛量子點(diǎn)、硒化鉛量子點(diǎn)、磷化銦量子點(diǎn)或砷化銦量子點(diǎn)中的任意一種或至少兩種的組合，優(yōu)選為硅量子點(diǎn)；

優(yōu)選地，所述量子點(diǎn)的粒徑為1-10nm，優(yōu)選為2-5nm。

5.一種檢測(cè)CAR-T細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)向待測(cè)樣本中加入所述第一配體，孵育后離心得到第一沉淀物；

(2)向步驟(1)所述的第一沉淀物中加入所述第二配體，孵育后離心得到第二沉淀物；

(3)將步驟(2)所述的第二沉淀物進(jìn)行流式檢測(cè)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(1)和步驟(2)所述孵育的溫度為3-6℃，優(yōu)選為4℃；

優(yōu)選地，步驟(1)和步驟(2)所述孵育的時(shí)間為10-60min，優(yōu)選為30min；

優(yōu)選地，步驟(1)和步驟(2)所述離心的速度為500-1000rpm，優(yōu)選為800rpm；

優(yōu)選地，步驟(1)和步驟(2)所述離心的時(shí)間為2-8min，優(yōu)選為5min。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在緩沖液中將待測(cè)樣本和所述第一配體混合，在3-6℃孵育5-60min，在500-1000rpm下離心2-8min，得到第一沉淀物；

(2)將步驟(1)所述的第一沉淀物洗滌后重懸，加入所述第二配體，在3-6℃孵育5-60min，在500-1000rpm下離心2-8min，離心后得到第二沉淀物；

(3)將步驟(2)所述的第二沉淀物洗滌后重懸，進(jìn)行流式檢測(cè)。

8.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的探針。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括細(xì)胞固定液和/或緩沖液；

優(yōu)選地，所述細(xì)胞固定液為含有體積分?jǐn)?shù)為0.1-1％甲醛和體積分?jǐn)?shù)為60-80％甲醇的磷酸鹽緩沖液；

優(yōu)選地，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液。

10.一種如權(quán)利要求8或9所述的試劑盒用于高通量檢測(cè)CAR-T細(xì)胞。