[發明專利]一種眼鏡蛇毒的純化方法及其產品

在審

• 申請號: 201711350149.2
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN109929020A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 徐苗煥;張保安
• 申請（專利權）人: 浙江京新藥業股份有限公司;上海京新生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/16;A61K38/17;A61P25/04
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;陳卓

1.一種眼鏡蛇毒的純化方法，其特征在于，其包括以下步驟：

(1)將含眼鏡蛇毒的磷酸緩沖液進行陽離子交換層析，得到含活性成分的洗脫液A；所述的含眼鏡蛇毒的磷酸緩沖液包括眼鏡蛇毒和磷酸緩沖液；

(2)將含活性成分的洗脫液A進行復合模式層析，得到含活性成分的洗脫液B；

(3)將含活性成分的洗脫液B脫鹽，得到活性成分。

2.一種眼鏡蛇毒的純化方法，其特征在于，其包括以下步驟：

(1)將含眼鏡蛇毒的磷酸緩沖液進行陽離子交換層析，得到含活性成分的洗脫液A；所述的含眼鏡蛇毒的磷酸緩沖液包括眼鏡蛇毒和磷酸緩沖液；所述的陽離子交換層析的填料的功能基團為磺丙基；

(2)將含活性成分的洗脫液A進行高效反相層析，得到活性成分；所述的高效反相層析使用梯度洗脫，所述的梯度洗脫的參數為：使用a％乙腈水溶液→b％乙腈水溶液洗脫；a為0～10，b為20～40。

3.一種眼鏡蛇毒神經毒素，其按照權利要求1或2所述的純化方法制得。

4.如權利要求3所述的眼鏡蛇毒神經毒素，其特征在于，神經毒素的含量大于98％；

和/或，最大單雜的含量≤1.5％。

5.如權利要求4所述的眼鏡蛇毒神經毒素，其特征在于，神經毒素的含量為98.2％～98.7％；

和/或，雜質1的含量≤1.5％，例如0.1％、0.3％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％；所述的雜質1在下述分析條件下相對于神經毒素的保留時間為1.090～1.1125，例如1.109、1.113、1.115、1.117或1.120：

色譜柱：sepax bio-C18，4.6*150mm，5μm，

流動相A：0.05M磷酸三鈉水溶液，其使用TFA調整pH至2.0

流動相B：0.1％TFA乙腈溶液，流速：1ml/min，波長：280nm，柱溫：40℃，進樣量：20μl

梯度：按下表A記載的參數梯度洗脫，Post time:5min；

表A

和/或，雜質2的含量≤1.0％，例如0％、0.40％、0.55％、0.60％或0.7％；所述的雜質2在下述分析條件下相對于神經毒素的保留時間為0.969～0.974，例如0.971、0.972或0.973：

色譜柱：sepax bio-C18，4.6*150mm，5μm，

流動相A：0.05M磷酸三鈉水溶液，其用TFA調整pH至2.0；

流動相B：0.1％TFA乙腈溶液，流速：1ml/min，波長：280nm，柱溫：40℃，進樣量：20μl

梯度：按下表A記載的參數梯度洗脫，Post time:5min；

表A

6.一種眼鏡蛇毒神經毒素，其特征在于，神經毒素的含量大于98％。

7.如權利要求5所述的眼鏡蛇毒神經毒素，其特征在于，神經毒素的含量為98.2％～98.7％；

和/或，所述的雜質的含量和種類如權利要求4或5所述。

8.一種藥物組合物，其包括如權利要求1～7中任一項所述的神經毒素和藥用輔料。

9.一種眼鏡蛇毒雜質1或2，其參數如權利要求5所述。

10.一種神經毒素的純度分析方法，其參數如下：

色譜柱：sepax bio-C18，4.6*150mm，5μm，

流動相A：0.05M磷酸三鈉水溶液，其用TFA調整pH至2.0；

流動相B：0.1％TFA乙腈溶液，流速：1ml/min，波長：280nm，柱溫：40℃，進樣量：20μl

梯度：按下表A記載的參數梯度洗脫，Post time:5min；

表A