[發(fā)明專利]一種眼鏡蛇毒的純化方法及其產(chǎn)品

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711350149.2
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN109929020A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發(fā)明（設計）人: 徐苗煥;張保安
• 申請（專利權）人: 浙江京新藥業(yè)股份有限公司;上海京新生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/16;A61K38/17;A61P25/04
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;陳卓

本發(fā)明公開了一種眼鏡蛇毒的純化方法及其產(chǎn)品。本發(fā)明提供了一種眼鏡蛇毒的純化方法，其包括以下步驟：(1)將含眼鏡蛇毒的磷酸緩沖液進行陽離子交換層析，得到含活性成分的洗脫液A；所述的含眼鏡蛇毒的磷酸緩沖液包括眼鏡蛇毒和磷酸緩沖液；(2)將含活性成分的洗脫液A進行復合模式層析，得到含活性成分的洗脫液B；(3)將含活性成分的洗脫液B脫鹽，得到活性成分。該純化方法工藝簡單，易于工業(yè)化，成本較低，且得到的產(chǎn)品純度高、有關物質含量低。

技術領域

本發(fā)明涉及一種眼鏡蛇毒的純化方法及其產(chǎn)品。

背景技術

眼鏡蛇毒是由蛇的毒腺分泌的一種天然蛋白質，含有多種蛋白質、多肽、酶類和其他小分子物質。而神經(jīng)毒素(Cobrotoxin，簡稱NT)作為眼鏡蛇毒的主要成分之一，其具有類似嗎啡的中樞鎮(zhèn)痛作用，用于頑固性疼痛、惡性腫瘤疼痛和關節(jié)痛的鎮(zhèn)痛治療，但鎮(zhèn)痛效果好于嗎啡，持續(xù)時間長，無成癮性和耐藥性，而且還能戒除嗎啡毒癮，因此在癌痛和戒毒方面具有獨特的治療作用，但兩者卻有截然不同的生物學特性。

1965年，楊振忠等通過陽離子交換纖維素CM-cellulose和Sephadex G-2_5首先從臺灣眼鏡蛇(Taiwan Cobra中分離出結晶毒蛋白，并命名為“cobratoxin，即眼鏡蛇神經(jīng)毒，并于1969年測定出cobratoxin的序列為:

LECHNQQSSQTPTTTGCSGGETNCYKKRWRDHRGYRTERGCGCPSVKNGIEINCCTTDRCNN，共62個氨基酸。(Yang CC,Yang HJ,Huang JS.The amino acid sequence of cobrotoxin[J}.Biochimica Biophysica Acta，1969,188:65)。

關于蛇毒神經(jīng)毒素的提取純化方法在科技文獻、藥學研究刊物等公開渠道已有相關報道，但普遍存在如生產(chǎn)成本高、生產(chǎn)周期長、質量難以控制、收率較低等技術問題。例如，專利CN101747409A中披露的分離提純步驟為離心處理、經(jīng)超濾膜、再用CMFF柱層析和凝膠柱層析，然而眾所周知，超濾步驟的操作時間長、超濾膜昂貴，對蛇毒神經(jīng)毒素的活性可能會有影響。專利CN105566482A披露了一種蛇毒神經(jīng)毒素中科博肽的分離提取工藝，但pH值對其產(chǎn)品的純度影響很大。專利CN102351951A披露的分離提取工藝為多次經(jīng)濾膜過濾，而且產(chǎn)品含有鹽，導致其工藝成本高、操作難度大、不易產(chǎn)業(yè)化。專利CN104327176A披露的分離提取工藝步驟為第一次陽離子柱層析、第二次陽離子柱層析、陰離子柱層析、凝膠過濾柱層析，而且每步之間都需要透析、很難進一步放大工藝、操作很麻煩。專利CN103387610A披露的分離提取工藝步驟采用SP-Sephodex-C25凝膠柱、Source S(XK5030)離子交換柱，最后超濾凍干，純度僅93％。

現(xiàn)有國家藥品質量標準中對單組份生物、生化藥品的純度要求通常為HPLC含量大于90％，科博肽(眼鏡蛇神經(jīng)毒素蛋白)國家藥品標準(WS1-XG-009-2000)規(guī)定要求：按干燥品計算，神經(jīng)毒蛋白含量不得少于35.0％；HPLC純度檢查主峰相對百分含量不得少于90.0％。而HPLC含量大于95％或更高的生物、生化單組份的高純度的藥物意味著制劑中與治療作用無關的雜物質含量更少，這對于保證藥品的質量、療效、改善藥物作用的時效、減少藥物的毒副反應都具有重要意義。而藥品原料的含量和純度，在保證藥品質量、療效、安全性、用藥劑型等方面具有決定作用。

綜上所述，本領域對于眼鏡蛇神經(jīng)毒素存在進一步提高其純度和實現(xiàn)工業(yè)化分離的需求。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題是現(xiàn)有眼鏡蛇毒的純化工藝繁雜、成本高、產(chǎn)品純度低等缺陷，進而提供一種眼鏡蛇毒的純化方法及其產(chǎn)品。該純化方法工藝簡單，易于工業(yè)化，成本較低，且得到的產(chǎn)品(例如神經(jīng)毒素)純度高、有關物質含量低。

本發(fā)明提供了一種眼鏡蛇毒的純化方法，其特征在于，其包括以下步驟：