[發明專利]一種檢測氨肽酶N活性的比色方法

有效

• 申請號: 201711348964.5
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN108004295B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 苗向陽;吳昀;王寅玨;郁惠珍;朱小立;趙婧
• 申請（專利權）人: 蘇州健雄職業技術學院
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;G01N21/78
• 代理公司: 蘇州市方略專利代理事務所(普通合伙) 32267
• 代理人: 馬廣旭

1.一種非疾病診斷目的的檢測氨肽酶N活性的比色方法，其特征在于：通過葫蘆[8]脲識別結合多肽探針，以金納米顆粒作為比色信號報告單元進行比色分析，進行氨肽酶N的活性檢測；所述多肽探針的近氨基端含有苯丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸片段；所述多肽探針的近羧基端含有谷氨酸-亮氨酸-亮氨酸-半胱氨酸片段；

所述的非疾病診斷目的的檢測氨肽酶N活性的比色方法，包括以下步驟：

（1）金納米顆粒的合成；所述金納米顆粒合成后加入陽離子鹽溶液，所述陽離子鹽溶液為25 μM的氯化鈉溶液；

（2）多肽功能化金納米顆粒的制備：多肽探針活化巰基后與金納米顆粒混合制備得到多肽功能化金納米顆粒；

（3）氨肽酶 N 活性的比色檢測：向多肽功能化金納米顆粒中加入氨肽酶 N后再加入葫蘆[8]脲反應，所述葫蘆[8]脲的濃度為100 μM，多肽功能化金納米顆粒與葫蘆[8]脲的反應時間為60分鐘；

所述苯丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸片段可以與葫蘆[8]脲以2:1的形式發生超分子組裝；

當檢測體系中存在活性的氨肽酶N時，氨肽酶 N 能夠識別并切割多肽探針近氨基端的苯丙氨酸及甘氨酸，破壞與葫蘆[8]脲的結合位點，葫蘆[8]脲無法與多肽功能化金納米顆粒發生相互作用，金納米顆粒在檢測體系中處于分散的狀態；

當檢測體系中不存在有活性的氨肽酶N時，葫蘆[8]脲識別多肽功能化金納米顆粒表面修飾的多肽探針的苯丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸片段，并進行組裝，形成多肽功能化金納米顆粒/葫蘆[8]脲超分子組裝體，金納米顆粒之間的距離被拉近，在檢測體系中處于聚集狀態；

比色分析進行氨肽酶N的活性檢測，所述比色分析為紫外-可見吸收光譜分析，波長為400-800 nm；

所述方法用于氨肽酶N活性檢測的最低檢測限為0 .096μg/mL。