[發(fā)明專利]同時表達A型、O型和Asia-1型口蹄疫病毒VP1基因重組腺病毒、構(gòu)建方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711348735.3
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN108103034B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊玉艾;任紅濤;劉健鵬;鄒權(quán);齊亞輝
• 申請（專利權(quán)）人: 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;北京生科基因科技有限公司;榆林市動物疫病預(yù)防控制中心;墊江縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所;陜西省動物衛(wèi)生監(jiān)督所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/42;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 北京智沃律師事務(wù)所 11620
• 代理人: 王繼勝

1.一種同時表達 A型、O型和 Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因重組腺病毒的構(gòu)建方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟一：從 O型、A型和 Asia-1型口蹄疫病毒中分別擴增出 VP1基因；

步驟二：將步驟一中獲得的 O型口蹄疫病毒 VP1基因通過 Kpn I和 Not I酶切位點插入至腺病毒穿梭載體 pAdTrack中的 CMV啟動子，形成腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1；

將步驟一中獲得的 A型口蹄疫病毒 VP1基因通過 Bgl II和 Sal I酶切位點插入至腺病毒穿梭載體 pAdTrack中的 CMV啟動子，通過 EcoRV酶切位點插入 pAdTrack-O1形成腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1-A1；

將步驟一中獲得的 Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因通過 Cla I和 Pst I酶切位點插入至腺病毒穿梭載體 pAdTrack中 CMV啟動子，形成腺病毒穿梭載體 pAdTrack-Y1；

步驟三：將步驟二的腺病毒穿梭載體 pAdTrack-Y1按 PCR方法擴增出含有 CMV啟動子的 CMV-Y1基因，通過 Sma I酶切位點插入至步驟二的腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1-A1中，形成重組腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1-A1-Y1；

步驟四：將步驟三中的重組腺病毒穿梭載體 pAdTrack-O1-A1-Y1經(jīng) Pme I酶切線性化后，轉(zhuǎn)化到含有腺病毒骨架載體 pAd-Easy-1的大腸桿菌 BJ5183感受態(tài)細(xì)胞中，形成重組腺病毒骨架載體 pAd-Easy-O1-A1-Y1；

步驟五：將步驟四中的重組腺病毒骨架載體 pAd-Easy-O1-A1-Y1經(jīng) Pac I線性化后，轉(zhuǎn)染人胚胎腎細(xì)胞 HEK293中，包裝出重組腺病毒 rAd-O1-A1-Y1。

2.如權(quán)利要求1所述方法構(gòu)建的一種同時表達 A型、O型和 Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因重組腺病毒，其特征在于，所述Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，O型口蹄疫病毒 VP1基因核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。

3.如權(quán)利要求 2所述的一種同時表達 A型、O型和 Asia-1型口蹄疫病毒 VP1基因重組腺病毒的應(yīng)用，其特征是：所述重組腺病毒應(yīng)用于制備防疫口蹄疫的藥物或試劑中。