[發明專利]一種相同供體來源人間充質干細胞的多批次原代分離方法有效
| 申請號： | 201711347861.7 | 申請日： | 2017-12-15 |
| 公開（公告）號： | CN108251358B | 公開（公告）日： | 2021-10-26 |
| 發明（設計）人： | 袁茵;魯欣;匡梅娜;黃思瑞 | 申請（專利權）人： | 廣東藥科大學 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205 | 代理人： | 胡輝 |
| 地址： | 510006 廣東省廣州市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 相同 供體 來源 人間 干細胞 批次 分離 方法 | ||
1.一種相同供體來源人間充質干細胞的多批次原代分離方法，其特征在于，包括下列步驟：
無菌采集供體組織并進行處理；
將處理后的供體組織剪碎，得到2-5mm3的供體組織小塊；
用100%人AB血清浸泡供體組織小塊5-20 min；
將供體組織小塊接種到細胞培養板中，并添加適量完全培養基，進行培養；
當游離出的貼壁細胞生長至80%-90%融合時，收獲原代間充質干細胞；
收獲原代間充質干細胞的同時，對原代培養體系中的供體組織小塊和培養上清進行回收再處理；其中供體組織小塊重復進行上述的100%人AB血清浸泡5-20 min及后續的處理，繼續收獲間充質干細胞；原代培養上清轉移到新的細胞培養瓶中再次孵育培養，繼續收獲間充質干細胞。
2.根據權利要求1所述的多批次原代分離方法，其特征在于：所述供體包括新生兒臍帶、胎盤、羊膜中的至少一種。
3.根據權利要求2所述的多批次原代分離方法，其特征在于：當供體為新生兒臍帶時，處理方法如下：無菌采集新生兒臍帶浸泡于緩沖液中，在無菌環境下，將臍帶剪成1-5cm長的小段，用緩沖液充分洗滌，去除殘留臍帶血；將臍帶小段縱向剖開，剔除血管。
4.根據權利要求3所述的多批次原代分離方法，其特征在于：緩沖液為含有適量抗生素的HBSS緩沖液或PBS緩沖液。
5.根據權利要求1所述的多批次原代分離方法，其特征在于：將供體組織小塊接種到細胞培養板中，將鋪好組織小塊的細胞培養板倒扣培養4-6 h后，再將細胞培養板翻正；向細胞培養板中添加適量完全培養基，繼續培養。
6.根據權利要求1所述的多批次原代分離方法，其特征在于：將供體組織小塊接種到細胞培養板中，在無菌條件下風干至組織小塊邊緣微干涸，再將鋪好組織小塊的細胞培養板倒扣培養4-6 h。
7.根據權利要求1所述的多批次原代分離方法，其特征在于：將供體組織小塊接種到細胞培養板中，靜置20-40分鐘，再添加適量完全培養基，進行培養。
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