[發明專利]一種具有還原響應性的水溶性殼聚糖基聚集誘導發光熒光探針的制備方法

有效

• 申請號: 201711345493.2
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN108117612B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 王征科;方雯;楊玲;胡巧玲;唐本忠
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08;G01N21/64
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 萬尾甜;韓介梅

1.一種具有還原響應性的水溶性殼聚糖基聚集誘導發光熒光探針，其特征在于，該熒光探針的結構如下：

其中，x₁為四苯基乙烯接枝率，m為1-殼聚糖的脫乙酰度，y為羧化度，且 x₁+ x₂+m+y為1。

2.一種如權利要求1所述的具有還原響應性的水溶性殼聚糖基聚集誘導發光熒光探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）稱取一定質量粘均分子量為1萬-100萬、脫乙酰度60%-95%的殼聚糖為溶質，以0.1mol/L的HCl溶液為溶劑，配制獲得殼聚糖濃度為0.01-0.05 g/mL的溶液A；

2）以無水甲醇為溶劑，配制濃度為0.01－0.05 g/mL的二硫代二丙酸即DTDP溶液，并使DTDP與溶液A中殼聚糖鏈上的氨基摩爾比為1:1-2:1，加入一定量的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽即EDC和N-羥基琥珀酰亞胺即NHS，使 DTDP與EDC的摩爾比為1:1.2-1:2，且EDC與NHS的摩爾比為1:1-1:1.5，在0-4℃冰浴條件下于無水甲醇中活化0.5-2 h，獲得溶液B；

3）采用恒壓滴液漏斗向溶液B中滴加溶液A，調節體系pH＝4-5，室溫條件下反應24-48h，旋蒸除去甲醇得到濃縮液，加入體積為濃縮液5-7倍的水，除去不溶物，獲得溶液C；

4）將溶液C裝入截留分子量為14000的透析袋中并置于去離子水中透析3-5天，取出透析后的溶液C凍干，獲得具有還原響應性的水溶性殼聚糖樣品D;

5）以具有還原響應性的水溶性殼聚糖樣品D為溶質，以DMSO為溶劑，在50-65 ℃溶脹24-48 h，再向該溶液中加入含異硫氰酸酯官能團的四苯基乙烯衍生物即TPEITC，TPEITC與樣品D中氨基的摩爾比為1%-20%，反應24-48 h，獲得溶液E；

6）向溶液E中加入無水乙醇，無水乙醇與溶液E的體積比為20，攪拌均勻后靜置至溶液分層，去除上清液，離心后，將沉淀用去離子水溶解，過濾得到濾液；

7）將四氫呋喃和去離子水以體積比1:1混合配制透析液，將步驟6）的濾液裝入截留分子量為3500的透析袋中并置于透析液中透析5-7天，取出后凍干，獲得具有還原響應性的水溶性殼聚糖基聚集誘導發光熒光探針。