[發明專利]用于qPCR精確定量Illumina平臺二代測序樣本的定量標準品及其復制方法在審
| 申請號： | 201711343444.5 | 申請日： | 2017-12-14 |
| 公開（公告）號： | CN108103174A | 公開（公告）日： | 2018-06-01 |
| 發明（設計）人： | 李同恩;羅璽;師鴻翔;周茜;陳田甜;方亞慧;劉春柳;鄭康;張振宇;趙鵬;王秉孝;朱兵 | 申請（專利權）人： | 中源協和基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6869 | 分類號： | C12Q1/6869;C12Q1/686;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 天津才智專利商標代理有限公司 12108 | 代理人： | 王曉紅 |
| 地址： | 300304 天津*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 復制 標準品 商品化試劑盒 定量標準品 接頭引物 稀釋 測序 樣本 標準品濃度 核苷酸序 緩沖體系 逐級稀釋 穩定劑 酶水 商品化 保存 | ||
1.一種用于qPCR精確定量Illumina平臺二代測序樣本的定量標準品的復制方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)以商品化試劑盒中的標準品為模板，利用P1、P2接頭引物，進行PCR擴增，接頭引物P1、P2的核苷酸序列為：
P1：5'-AATGATACGGCGACCACCGAGA-3'SEQ ID NO:1
P2：5'-CAAGCAGAAGACGGCATACGAG-3'SEQ ID NO:2
PCR擴增反應體系：
反應體系在PCR儀運行以下程序：
(2)反應完成后用AMPure XP bead純化，純化完成后，進行Qubit定量，Qubit測定濃度后，10倍逐級初步稀釋，稀釋后的樣品進行定量實驗，挑選出與商品化標準品濃度最為接近的樣品，作為復制的標準品1，復制的標準品得到后，用無酶水進行10倍逐級稀釋，得到復制的標準品第2-6個；
(3)復制的標準品保存于包含緩沖體系和穩定劑的溶液中，各組分的比例：
2.根據權利要求1所述用于qPCR精確定量Illumina平臺二代測序樣本的定量標準品的復制方法，其特征在于，所述穩定劑為牛血清白蛋白，海藻糖，甜菜堿，carrier RNA，甘油，EDTA，吐溫20中的一種或多種。
3.根據權利要求2所述用于qPCR精確定量Illumina平臺二代測序樣本的定量標準品的復制方法，其特征在于，所述穩定劑為體積濃度為5％的甘油和10nM海藻糖中的一種。
4.根據權利要求1所述用于qPCR精確定量Illumina平臺二代測序樣本的定量標準品的復制方法，其特征在于，所述緩沖體系為PH＝8.0的10mM Tris-HCl。
5.如權利要求1-4任一項所述用于qPCR精確定量Illumina平臺二代測序樣本的定量標準品的復制方法制得的定量標準品。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中源協和基因科技有限公司，未經中源協和基因科技有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201711343444.5/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
