[發明專利]氨解方法及氨解組合物有效
| 申請號： | 201711342322.4 | 申請日： | 2017-12-14 |
| 公開（公告）號： | CN109956987B | 公開（公告）日： | 2022-05-17 |
| 發明（設計）人： | 王建鵬;賀玉卓;范玉峰;趙禹 | 申請（專利權）人： | 南京金斯瑞生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07H21/00 | 分類號： | C07H21/00 |
| 代理公司： | 北京華睿卓成知識產權代理事務所(普通合伙) 11436 | 代理人： | 程淼 |
| 地址： | 211100 江蘇省南京*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 氨解 方法 組合 | ||
1.一種用于在DNA固相合成后進行氨解的方法，包括以下步驟：
1)向包括用于合成DNA片段的固相載體的合成柱內加入氨解組合物；
2)將所述合成柱置于裝有氨解緩沖液的可密封容器內，并保持所述合成柱位于所述氨解緩沖液的液面上方；以及
3)以微波處理所述可密封容器，使得所述固相載體處于所述氨解緩沖液的蒸汽氣氛中；
4)取出所述合成柱，以洗脫液處理所述固相載體并收集流出液；
其中所述氨解組合物為1:2-20:5-40體積比的二亞乙基三胺、1M堿性水溶液和醇的混合溶液，所述堿性水溶液選自氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈹、氫氧化鎂、氫氧化鈣溶液及其組合，且所述醇選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、仲丁醇、叔丁醇及其組合；
其中所述氨解緩沖液為1:5-80體積比的醇和水的混合溶液。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述固相載體為CPG粉末或CPG Frits。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述合成柱為一個或更多個。
4.如權利要求1所述的方法，其中，以體積計，步驟1)中所述氨解組合物的用量為所述固相載體體積的0.3至5倍。
5.如權利要求1所述的方法，其中步驟3)中所述微波處理包括以700W微波處理5至20分鐘。
6.如權利要求1所述的方法，其中步驟4)中在所述洗脫液處理之前還包括以清洗試劑清洗所述合成柱一次或更多次。
7.如權利要求6所述的方法，其中所述清洗試劑為甲醇水溶液或乙腈。
8.如權利要求1所述的方法，其中所述氨解組合物為1:3:6體積比的二亞乙基三胺、1M氫氧化鋰水溶液和乙醇的混合溶液。
9.如權利要求1所述的方法，其中所述DNA片段長度為10-200個堿基。
10.一種氨解組合物，所述氨解組合物為1:2-20:5-40體積比的二亞乙基三胺、1M堿性水溶液和醇的混合溶液，所述堿性水溶液選自氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈹、氫氧化鎂、氫氧化鈣溶液及其組合，且所述醇選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、仲丁醇、叔丁醇及其組合。
11.根據權利要求10所述的氨解組合物，所述氨解組合物為1:3:6體積比的二乙基三胺、1M氫氧化鋰水溶液和乙醇的混合溶液。
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