[發(fā)明專利]用于心肌細(xì)胞分離提純的密度梯度液試劑盒及使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711340953.2
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號(hào): CN108165525A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董念國;劉保慶;李飛;尚小珂;史峰;邱雪峰;史嘉瑋;陳思;吳龍;劉雋煒;劉義華;胡行健;洪昊;李華東;孫永豐;喬韡華;李庚;朱鵬;李光周;王怡軒;劉發(fā)遠(yuǎn);謝飛;劉名;劉春耕;黃玉明
• 申請（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/077
• 分類號(hào): C12N5/077
• 代理公司: 武漢智權(quán)專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42225
• 代理人: 張凱

1.一種用于心肌細(xì)胞分離提純的密度梯度液試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括第一試劑、第二試劑，其中：

所述第一試劑包括超純水、Percoll液和緩沖液，其體積比為1：3：1；

所述第二試劑包括超純水、Percoll液和緩沖液，其體積比為2：2：1；

所述第一試劑和第二試劑中的緩沖液包括35.064-40.032份Nacl，1.975-2.013份Kcl，0.615-1.107份MgSO₄.7H₂O，4.865-5.226份葡萄糖，0.301-0.384份KH₂PO₄，0.213-0.365份Na₂HPO₄，23.830-29.788份4-羥乙基哌嗪乙磺酸。

2.如權(quán)利要求1所述的一種用于心肌細(xì)胞分離提純的密度梯度液試劑盒，其特征在于：所述緩沖液還包括超純水和NaOH，所述緩沖液用超純水定容，用NaOH調(diào)整PH至7.5。

3.如權(quán)利要求1所述的一種用于心肌細(xì)胞分離提純的密度梯度液試劑盒，其特征在于：所述第一試劑和所述第二試劑用于配制密度梯度液，所述密度梯度液用于使含有心肌細(xì)胞與非心肌細(xì)胞的細(xì)胞懸液分層。

4.一種如權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的用于心肌細(xì)胞分離提純的密度梯度液試劑盒的使用方法，其特征在于：

S1，剪下的心臟組織置于裝有心肌緩沖液的離心管中；

S2，將0.05％Ⅱ型膠原酶加入離心管中，搖床培養(yǎng)，棄上清；

S3，將0.1％Ⅱ型膠原酶加入步驟S2處理后的離心管中，搖床培養(yǎng)，取上清放入血清中混勻；

S4，對上清液與血清的混合液進(jìn)行過濾、離心，離心后用心肌緩沖液重懸，將細(xì)胞懸液加入離心管中；

S5，使用所述第一試劑和所述第二試劑配制密度梯度液，將細(xì)胞懸液緩慢加入配好的密度梯度液中，進(jìn)行離心；離心后可見液面分層，吸出中間層。

5.如權(quán)利要求4所述的用于心肌細(xì)胞分離提純的試劑盒的使用方法，其特征在于：所述心肌緩沖液包括7.012-8.007份Nacl，0.395-0.403份Kcl，0.123-0.222份MgSO₄.7H₂O，0.973-1.046份葡萄糖，0.060-0.077份KH₂PO₄，0.042-0.071份Na₂HPO₄，4.766-5.958份4-羥乙基哌嗪乙磺酸；所述心肌緩沖液用超純水定容，用NaOH調(diào)整PH至7.5。

6.如權(quán)利要求4所述的用于心肌細(xì)胞分離提純的密度梯度液試劑盒的使用方法，其特征在于：使用所述第一試劑和所述第二試劑按體積比4:5配制所述密度梯度液。

7.如權(quán)利要求4所述的用于用于心肌細(xì)胞分離提純的密度梯度液試劑盒的使用方法，其特征在于：所述密度梯度液配制方法為：將第一試劑懸空滴加入離心管中，再緩慢加入第二試劑。