[發明專利]一種森林山蛭抗血栓多肽Sylvestin及其體外表達制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711340940.5
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN108101975B
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 賴仞;方鳴謙;韓亞君
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明動物研究所
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/17;A61P7/02;A61P9/10;C12R1/19
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種森林山蛭抗血栓多肽Sylvestin及其體外表達制備方法，屬于多肽合成表達技術領域，所述多肽Sylvsetin的氨基酸序列如Seq ID No.1所示。本發明還提供了所述多肽Sylvestin的改造肽，所述改造肽的氨基酸序列如Seq ID No.5、Seq ID No.6、Seq ID No.7或Seq ID No.8所示。所述多肽Sylvestin及其改造肽具有FXIIa抑制活性，以及抗血栓和治療中風的功效。本發明所述的體外表達制備方法，實現了山蛭Sylvestin多肽在原核生物體內的規模化、低成本生產，通過純化應用于生物功能藥物的制備。

技術領域

本發明屬于多肽合成表達技術領域，具體涉及一種森林山蛭抗血栓多肽Sylvestin及其體外表達制備方法和應用。

背景技術

血栓是導致心血管疾病發病和致死的主要原因，發病率與年齡增長成正相關。我國正在步入老齡化的國家，心血管疾病成為一個沉重的社會負擔。長期以來，針對血液凝固、血小板激活與聚集和血栓溶解等生理機制開發出了大量的抗血栓藥物。但是，許多抗血栓藥物因具有出血活性、導致低血壓等全身性副作用而受到限制。因此，挖掘新的、特異的抗血栓藥物一直以來是研究的熱點。

近年來，大鼠實驗模型和臨床研究表明FXI(血漿凝血激酶前質)或FXII(接觸因子)對于血栓的形成和穩定有重要的作用，尤其它們對止血有較小的影響，即FXI或FXII的抑制劑具有抗血栓的作用，而不會有出血副作用。目前研究的FXI或FXII的抑制劑包括單克隆抗體、反義寡核苷酸，多肽、化學小分子等，其中單克隆抗體、反義寡核苷酸存在價格昂貴、起效慢、可能不易控制等問題，相比之下，多肽作為FXI或FXII的抑制劑更適合實際應用。而目前研究的多肽存在種類少，活性低，不穩定的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種活性高、穩定性好，適合于工業生產的森林山蛭抗血栓多肽Sylvestin及其體外表達制備方法和應用。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：一種森林山蛭抗血栓多肽Sylvestin，所述多肽Sylvsetin的氨基酸序列如Seq IDNo.1所示。

本發明提供了編碼所述的多肽Sylvestin的核苷酸，所述核苷酸序列如SeqIDNo.2所示。

本發明還提供了一種森林山蛭抗血栓重組多肽Sylvestin，所述重組多肽Sylvestin包括多肽Sylvestin和腸激酶酶切位點片段，所述重組多肽Sylvestin的序列如Seq IDNo.3所示。

本發明提供了所述的重組多肽Sylvestin的核苷酸，所述核苷酸序列如SeqIDNo.4所示。

本發明還提供了一種多肽Sylvestin的重組表達載體，所述表達載體包括如SeqIDNo.2所示核苷酸序列。

本發明提供了一種包括多肽Sylvestin的重組表達載體的重組表達菌株。

本發明還提供了多肽Sylvestin定點突變獲得的改造肽，所述改造肽的氨基酸序列如Seq IDNo.5、Seq IDNo.6、Seq IDNo.7或Seq IDNo.8所示。

本發明還提供了所述多肽Sylvestin的體外表達制備方法，包括以下步驟：1)構建權利要求6所述的重組表達菌株；2)誘導所述重組菌株表達獲得含重組多肽Sylvestin的菌液；所述誘導的溫度為16～30℃，所述誘導的IPTG濃度為0.05～0.55mmol/L，所述誘導的時間為1～18h；3)從所述菌液中分離純化獲得重組多肽Sylvestin；4)用腸激酶酶切所述重組多肽Sylvestin獲得多肽Sylvestin。

本發明還提供了所述的森林山蛭抗血栓多肽Sylvestin或所述的改造肽在制備抗血栓藥物中的應用。