[發(fā)明專利]一種森林山蛭抗血栓多肽Sylvestin及其體外表達(dá)制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711340940.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108101975B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴仞;方鳴謙;韓亞君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/17;A61P7/02;A61P9/10;C12R1/19
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種森林山蛭抗血栓重組多肽Sylvestin，其特征在于，所述重組多肽Sylvestin包括多肽Sylvestin和腸激酶酶切位點(diǎn)片段，所述重組多肽Sylvestin的序列如Seq ID No.3所示。

2.編碼權(quán)利要求1所述的重組多肽Sylvestin的核苷酸，所述核苷酸序列如Seq IDNo.4所示。

3.一種重組多肽Sylvestin的重組表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體包括如Seq IDNo.4所示的核苷酸序列。

4.一種重組多肽Sylvestin的重組表達(dá)菌株，其特征在于，所述重組表達(dá)菌株包括權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體。

5.一種森林山蛭抗血栓多肽Sylvestin定點(diǎn)突變獲得的改造肽，其特征在于，所述改造肽的氨基酸序列如Seq ID No.5、Seq ID No.6、Seq ID No.7或Seq ID No.8所示。

6.權(quán)利要求1所述的多肽Sylvestin的體外表達(dá)制備方法，包括以下步驟：

1）構(gòu)建權(quán)利要求4所述的重組表達(dá)菌株；

2）誘導(dǎo)所述重組菌株表達(dá)，獲得含重組多肽Sylvestin的菌液；所述誘導(dǎo)的溫度為16~30℃，所述誘導(dǎo)的IPTG濃度為0.05~0.55mmol/L，所述誘導(dǎo)的時(shí)間為1~18h；

3）從所述菌液中分離純化獲得Seq ID No.3所示氨基酸序列的重組多肽Sylvestin；

4）用腸激酶酶切所述重組多肽Sylvestin，獲得多肽Sylvestin；

所述多肽Sylvestin的氨基酸序列如Seq ID No.1所示。

7.權(quán)利要求5所述的改造肽在制備抗血栓藥物中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求5所述的改造肽在制備治療中風(fēng)藥物中的應(yīng)用。