[發明專利]一種柏子仁藥材UPLC特征圖譜的構建及其檢測方法

有效

• 申請號: 201711340900.0
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN108152399B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 朱德全;程松;劉桂聯;薛鵬輝;陳向東
• 申請（專利權）人: 廣東一方制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州致信偉盛知識產權代理有限公司 44253
• 代理人: 彭玲

1.一種柏子仁藥材UPLC特征圖譜的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

(a)對照品溶液的制備：分別取色氨酸對照品和兒茶素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

(b) 供試品溶液的制備：將本品粉末過二號篩，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50-70%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用50-70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

(c) 色譜條件與系統適用性試驗：以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫；柱溫為30℃；流速為0.4ml/min；檢測波長為210nm；理論板數按色氨酸峰計算應不低于5000；所述（c）中選用Waters Cortecs T3色譜柱，柱長為100nm，內徑為2.1mm，粒徑為1.6μm；

（d）對照特征圖譜的建立：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1μl，注入超高效液相色譜儀，測定，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”，建立柏子仁藥材對照特征圖譜，確定具有7個特征峰，其中峰3為色氨酸、峰4為兒茶素；以峰3色氨酸峰為參照峰S峰，各特征峰的相對保留時間分別為：峰1為0.732、峰2為 0.788、峰5為3.017、峰6為3.097、峰7為3.145，相對保留時間在規定值的±5%之內；

還包括步驟（e）特征峰的指認：采用UPLC-MS-MS高分辨質譜儀進行測定，其中質譜條件為：MS系統: 四極桿-靜電場軌道阱高分辨串聯質譜；離子化模式: ESI–和 ESI+；錐孔電壓: +/-3500/3200V；蒸發器溫度：350℃；毛細管溫度：320℃；全掃描：掃面范圍為分子量100~1200，一級質譜分辨率70000，二級質譜分辨率為17500。

2.根據權利要求1所述的一種柏子仁藥材UPLC特征圖譜的構建方法，其特征在于，所述（b）中，供試品溶液的制備為：將本品粉末過二號篩，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，0.22μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

3.一種柏子仁藥材的質量檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(a) 對照品溶液的制備：分別取色氨酸對照品和兒茶素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

(b) 供試品溶液的制備：將本品粉末過二號篩，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50-70%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用50-70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

(c) 色譜條件與系統適用性試驗：以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫；柱溫為30℃；流速為0.4ml/min；檢測波長為210nm；理論板數按色氨酸峰計算應不低于5000；所述（c）中選用Waters Cortecs T3色譜柱，柱長為100nm，內徑為2.1mm，粒徑為1.6μm；

（d）測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1μl，注入超高效液相色譜儀，測定，即得柏子仁藥材的特征圖譜，將柏子仁藥材特征圖譜與柏子仁藥材對照特征圖譜進行比較，鑒別柏子仁藥材的有效成分以及判別柏子仁藥材的真偽。

4.根據權利要求3所述的一種柏子仁藥材的質量檢測方法，其特征在于，所述（b）中，供試品溶液的制備為：將本品粉末過二號篩，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，0.22μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。