[發(fā)明專利]一種白芍HPLC特征圖譜的構(gòu)建及其檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711340650.0
• 申請(qǐng)日: 2017-12-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108061768A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁青;朱德全;劉桂聯(lián);霍文杰;潘禮業(yè)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東一方制藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州致信偉盛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44253
• 代理人: 彭玲

本發(fā)明公開(kāi)了一種白芍HPLC特征圖譜的構(gòu)建及其檢測(cè)方法，本發(fā)明針對(duì)白芍存在的質(zhì)量控制問(wèn)題，分別建立了含硫白芍HPLC特征圖譜和無(wú)硫白芍HPLC特征圖譜，同時(shí)采用高效液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用分析方法對(duì)含硫白芍與無(wú)硫白芍進(jìn)行成分的分析與指認(rèn)，采用本發(fā)明建立的白芍的HPLC特征圖譜鑒別白芍熏硫后產(chǎn)生的芍藥苷亞硫酸酯產(chǎn)物來(lái)判斷白芍藥材是否經(jīng)硫磺熏蒸，其與常規(guī)的二氧化硫檢測(cè)方法相比，該方法簡(jiǎn)單、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可以用于白芍熏硫與否的檢測(cè)，可以較全面、準(zhǔn)確快速鑒別白芍的真?zhèn)渭捌焚|(zhì)優(yōu)劣，尤其適合白芍規(guī)模化生產(chǎn)的檢測(cè)和鑒別。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥鑒別領(lǐng)域，具體涉及一種白芍HPLC特征圖譜的構(gòu)建及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

硫磺熏蒸中藥材是我國(guó)中藥材的傳統(tǒng)加工方法之一，通過(guò)適量的硫磺熏蒸，可以達(dá)到防霉、防蟲(chóng)、防潮、延長(zhǎng)藥材儲(chǔ)存時(shí)間的目的。但是，大量研究表明，硫熏通常會(huì)使中藥材的有效成分明顯降低，更重要的是硫熏后殘留在中藥飲片的硫化合物對(duì)人體健康有害，甚至在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化為致癌物亞硝胺。

白芍是中藥處方中常用的一味養(yǎng)肝補(bǔ)血藥，有傳統(tǒng)加工方法為芍藥根經(jīng)去皮水煮后硫磺熏制再干燥。目前白芍的產(chǎn)地初加工方法主要采用水煮至透心后曬干，但由于煮后不易曬干、且容易發(fā)霉，因此藥農(nóng)普遍采用硫磺熏蒸，尤其在安徽亳州等白芍主產(chǎn)區(qū)，約50％的白芍均采用硫磺熏蒸方法，而且至少要熏蒸2～3次，這樣處理后白芍不易霉變，曬干后易于儲(chǔ)存。有學(xué)者通過(guò)利用HPLC檢測(cè)市售的22批白芍飲片，探討市售白芍飲片低于藥典標(biāo)準(zhǔn)的原因，結(jié)果顯示硫磺熏蒸是導(dǎo)致市售白芍飲片質(zhì)量改變的原因。在調(diào)配時(shí)常發(fā)現(xiàn)白芍飲片有一股刺激性氣味，市場(chǎng)白芍飲片抽檢常出現(xiàn)含硫量超標(biāo)現(xiàn)象。

白芍炮制過(guò)程中，因硫磺熏蒸后可使部分芍藥苷轉(zhuǎn)變成為新成分芍藥苷亞硫酸酯，從而使芍藥苷的含量降低。因此，要避免使用硫磺熏蒸，減少有效成分芍藥苷的流失。而白芍藥材中含硫量的測(cè)定方法一般采用2015版中國(guó)藥典規(guī)定的酸堿滴定法，該方法操作較為繁瑣，且檢測(cè)靈敏度相對(duì)較低。

因此，非常有必要建立一種快速、靈敏度高的用于白芍的真?zhèn)舞b別及熏硫鑒別的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種白芍HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，該方法重現(xiàn)性良好，準(zhǔn)確可靠，通過(guò)所建立的白芍HPLC特征圖譜可以實(shí)現(xiàn)對(duì)白芍是否熏硫及相關(guān)偽品全面而有效的鑒別。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種白芍HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟：

(a)混合對(duì)照品溶液的制備：取沒(méi)食子酸、兒茶素、芍藥內(nèi)酯、芍藥苷、1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含沒(méi)食子酸50μg、兒茶素30μg、芍藥內(nèi)酯100μg、芍藥苷160μg、1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖30μg、苯甲酰芍藥苷30μg的混合對(duì)照品溶液，搖勻，即得；

(b)供試品溶液的制備：取含硫和無(wú)硫白芍樣品0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，超聲處理30-45分鐘，放冷，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；

(c)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈和0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速：1.0ml/min；柱溫為30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；