[發(fā)明專利]一種白芍HPLC特征圖譜的構(gòu)建及其檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711340650.0
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN108061768A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁青;朱德全;劉桂聯(lián);霍文杰;潘禮業(yè)
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東一方制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州致信偉盛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44253
• 代理人: 彭玲

1.一種白芍HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟：

(a)混合對照品溶液的制備：取沒食子酸、兒茶素、芍藥內(nèi)酯、芍藥苷、1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖、苯甲酰芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含沒食子酸50μg、兒茶素30μg、芍藥內(nèi)酯100μg、芍藥苷160μg、1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖30μg、苯甲酰芍藥苷30μg的混合對照品溶液，搖勻，即得；

(b) 供試品溶液的制備：分別取含硫和無硫白芍樣品0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，超聲處理30-45分鐘，放冷，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；

(c) 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈和0.1%磷酸溶液為流動相按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速：1.0ml/min；柱溫為30℃；檢測波長為230nm；

（d）含硫白芍對照特征圖譜的建立：分別精密吸取混合對照品溶液與含硫供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”，建立含硫白芍對照特征圖譜，確定具有7個特征峰，峰1~6分別與參照物峰相對保留時間一致，7個特征峰分別為：峰1為沒食子酸、峰2為兒茶素、峰3為芍藥內(nèi)酯、峰4為芍藥苷、峰5為1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖、峰6為苯甲酰芍藥苷、峰7為芍藥苷亞硫酸酯；以峰4芍藥苷峰為參照峰，各特征峰的相對保留時間分別為：0.24、0.67、0.87、1.00、1.48、1.85、0.58，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的±10%內(nèi)；且峰7相對峰面積≥0.003；

（e）無硫白芍對照特征圖譜的建立：分別精密吸取混合對照品溶液與無硫供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)”，建立無硫白芍對照特征圖譜，確定具有6個特征峰，峰1~6分別與參照物峰相對保留時間一致，6個特征峰分別為：峰1為沒食子酸、峰2為兒茶素、峰3為芍藥內(nèi)酯、峰4為芍藥苷、峰5為1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖、峰6為苯甲酰芍藥苷；以峰4芍藥苷峰為參照峰，各特征峰的相對保留時間分別為：0.25、0.70、0.90、1.0、1.60、2.21，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的±10%內(nèi)，且在相對保留時間為0.58±5%位置出現(xiàn)的色譜峰相對峰面積應(yīng)＜0.003。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白芍UPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述（b）中，含硫白芍樣品中二氧化硫的含量大于0小于400mg/kg。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白芍HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，還包括步驟（f）色譜峰的指認(rèn)：通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析方法對含硫白芍與無硫白芍進(jìn)行成分的分析與指認(rèn)，通過對一級質(zhì)譜與二級質(zhì)譜圖譜的分析及文獻(xiàn)報道，確定含硫白芍中多于無硫白芍的色譜峰為芍藥苷亞硫酸酯。