[發明專利]用于轉基因玉米抗蟲蛋白Vip3Aa20的膠體金免疫層析速測卡及其使用方法

在審

• 申請號: 201711328797.8
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN108051599A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 金蕪軍;劉衛曉;李亮;宛煜嵩;苗朝華;黃衛紅;董美;高進;王迪;胡曉穎;柳方方
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 葉立濤;周際

本發明公開了用于轉基因玉米抗蟲蛋白Vip3Aa20的膠體金免疫層析速測卡及其使用方法，所述膠體金免疫層析速測卡包括卡殼和卡殼內的試紙條，所述試紙條包括底板以及粘著在底板上依次相連的樣品墊、金標墊、反應膜和吸水墊，所述金標墊包被抗蟲蛋白Vip3Aa20單克隆抗體?膠體金結合物，從而適用于轉基因玉米及其產品中抗蟲蛋白Vip3Aa20的現場快速檢測以及安全性評價。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，具體涉及到用于轉基因玉米抗蟲蛋白 Vip3Aa20膠體金免疫層析速測卡及其使用方法。

背景技術

蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一種廣泛存在于土壤中的革蘭氏陽性菌，在營養生長期分泌具有高抗蟲活性的可溶蛋白(Vegetative InsecticidalProteins,Vip proteins)，在接種15個小時至產孢期，菌液上清均可檢測到Vip3蛋白的表達，抗蟲蛋白Vip3對鱗翅類(Lepidoptera)昆蟲有廣泛毒性，當昆蟲取食Vip3蛋白后，該蛋白經中腸蛋白酶活化，活化的蛋白穿透圍食膜，與中腸細胞的上皮細胞頂膜特異蛋白結合并形成腸穿孔，從而破壞細胞的滲透平衡，引起細胞腫脹裂解，最終導致死亡，因此Vip3基因已成為植物基因工程及轉基因育種應用中最具有潛力和應用前景的抗蟲基因，其中Vip3Aa基因已成功的被用于轉基因棉花和玉米。

但是轉基因作物的飛速發展在帶來巨大經濟利益的同時，人們也越來越關注轉基因作物可能帶來的不可預期的食用安全及環境安全性問題，越來越多的國家要求對轉基因產品進行檢測以實行標識制度。

免疫膠體金技術(Immune colloidal gold technique)是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。膠體金是由氯金酸 (HAuCL4)在還原劑如抗壞血酸、檸檬酸鈉等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，稱為膠體金。膠體金在弱堿環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金標記技術是免疫層析快速診斷的核心技術，它以膠體金作為示蹤標記物應用于抗原抗體反應，其實質是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域，目前國內尚未有商業化的Vip3Aa20試紙條生產。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

本發明的目的在于提供用于轉基因玉米抗蟲蛋白Vip3Aa20的膠體金免疫層析速測卡及其使用方法，從而適用于轉基因玉米及其產品中抗蟲蛋白 Vip3Aa20的現場快速檢測以及安全性評價。

為實現上述目的，本發明提供了一種用于轉基因玉米抗蟲蛋白Vip3Aa20 的膠體金免疫層析速測卡，包括卡殼和卡殼內的試紙條，所述試紙條包括底板以及粘著在底板上依次相連的樣品墊、金標墊、反應膜和吸水墊，所述金標墊包被抗蟲蛋白Vip3Aa20單克隆抗體-膠體金結合物。

上述膠體金免疫層析速測卡在另一種實施方式中，抗蟲蛋白Vip3Aa20單克隆抗體由保藏號為CGMCC No.14725的雜交瘤細胞株1F9-1F5分泌得到。

上述膠體金免疫層析速測卡在另一種實施方式中，反應膜上設有包被抗蟲蛋白Vip3Aa20單克隆抗體的檢測線和包被羊抗鼠IgG的質控線。

上述膠體金免疫層析速測卡在另一種實施方式中，所述反應膜上設有的包被抗蟲蛋白Vip3Aa20單克隆抗體由保藏號為CGMCC No.14733的雜交瘤細胞株2G3-1D7分泌得到。

上述膠體金免疫層析速測卡在另一種實施方式中，檢測線和質控線間隔 0.5-1.0cm。