[發明專利]用于轉基因玉米抗蟲蛋白Vip3Aa20的膠體金免疫層析速測卡及其使用方法

在審

• 申請號: 201711328797.8
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN108051599A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 金蕪軍;劉衛曉;李亮;宛煜嵩;苗朝華;黃衛紅;董美;高進;王迪;胡曉穎;柳方方
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 葉立濤;周際

1.一種用于轉基因玉米抗蟲蛋白Vip3Aa20的膠體金免疫層析速測卡，包括卡殼和卡殼內的試紙條，所述試紙條包括底板以及粘著在底板上依次相連的樣品墊、金標墊、反應膜和吸水墊，其特征在于，所述金標墊包被抗蟲蛋白Vip3Aa20單克隆抗體-膠體金結合物。

2.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，抗蟲蛋白Vip3Aa20單克隆抗體由保藏號為CGMCC No.14725的雜交瘤細胞株1F9-1F5分泌得到。

3.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，反應膜上設有包被抗蟲蛋白Vip3Aa20單克隆抗體的檢測線和包被羊抗鼠IgG的質控線。

4.根據權利要求3所述的膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，反應膜上設有的包被抗蟲蛋白Vip3Aa20單克隆抗體由保藏號為CGMCC No.14733的雜交瘤細胞株2G3-1D7分泌得到。

5.根據權利要求3所述的膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，檢測線和質控線間隔0.5-1.0cm。

6.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，所述卡殼上設有加樣孔和觀察窗，所述加樣孔設于樣品墊上方，所述觀察窗設于反應膜上方。

7.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，所述樣品墊、金標墊、反應膜和吸水墊之間各設有1-2mm的重疊區。

8.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，所述底板為聚氯乙烯板，所述反應膜為硝酸纖維素膜。

9.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析速測卡，其特征在于，所述樣品墊由玻璃纖維膜或濾紙制成，所述吸水墊由濾紙制成。

10.根據權利要求1所述的膠體金免疫層析速測卡的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)待測樣品前處理：若待測樣品為液體物質時，則直接取40-60μL待測樣品檢測，若待測樣品為非液體物質時，則需要將待測樣品90-110mg磨碎，加入0.5-1.5mL樣品處理液充分混勻，冰上靜置25-35min后取上清40-60μL檢測；

其中，樣品處理液的配方為：1M Tris,pH 7.5 500uL，1M NaCL 1.5mL，0.5M EDTA20uL，50％甘油2mL，10％SDS 1mL，用雙蒸水配成10mL，使用時添加1片蛋白酶抑制劑以及50uL的1mM苯甲基磺酰氟；

2)檢測：將待測樣品滴入加樣孔內，室溫下作用5-10min，然后觀察結果；

3)檢測結果分析：

陽性：質控線、檢測線均呈現條帶，說明待測樣本中有Vip3Aa20蛋白存在；

陰性：檢測線不出現條帶，質控線呈現條帶，說明待測樣本中沒有Vip3Aa20蛋白存在；

失效：如果檢測線、質控線均不出現條帶或僅有檢測線出現條帶，說明試紙條失效。