[發明專利]一種面包樹果實凝集素的提取方法

有效

• 申請號: 201711327644.1
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN107827965B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 楊愈豐;張曉青;施青;劉振勇;李均;彭莉萍
• 申請（專利權）人: 遵義醫科大學
• 主分類號: C07K14/42
• 分類號: C07K14/42;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 黃書凱

本方案公開了一種面包樹果實凝集素的提取方法，包括(1)原料制備：從新鮮的面包樹果實中取果實籽，得新鮮原料；(2)打漿：在新鮮原料中加入Tris?HCl緩沖液，經勻漿機打碎得漿狀原料；(3)熱水浴浸提：在40～90℃的條件下對漿狀原料浸提1～2h，浸提后過濾得濾液；(4)第一次離心：在4000～8000r/min的條件下對濾液離心處理15～30min，然后取上清液；(5)硫酸銨沉淀目的蛋白：在上清液中加入硫酸銨至飽和度為60～100％，靜置2～8h得懸濁液；(6)第二次離心：在4000～8000r/min的條件下對懸濁液離心處理15～30min，棄上清液，沉淀用Tris?HCl緩沖液重懸，得面包樹果實凝集素粗品。采用本方案的方法提取面包樹果實凝集素，能有效提高面包樹果實凝集素的提取率和純度。

技術領域

本發明屬于植物有效成分提取技術領域，特別涉及一種面包樹果實凝集素的提取方法。

背景技術

凝集素是一組廣泛分布在多種動物、植物、真菌、細菌和病毒等生物的非免疫來源的糖蛋白，包含至少一個非催化結構域，能夠特異性地識別和可逆性地結合到特定的游離糖或寡糖上，且在不改變糖分子結構的基礎上發揮一系列的生物學效應。植物凝集素主要分布在植物中，以儲藏器官和繁殖器官為主。大量研究指出，植物凝集素在對靶細胞的識別和結合，細胞的定位，誘導細胞凋亡與自噬，免疫學的防御功能以及細胞毒性和跨膜信號的轉導等方面均發揮著重要的調控作用，特別是其在抗腫瘤和抗病毒方面的應用越來越廣泛和成熟。由于植物凝集素來源廣泛、特異性高且功能多樣，是細胞生物學和免疫學的重要工具。

面包樹（Artocarpus incisa (Thunb.) L.）原產于新幾內亞，印度尼西亞，菲律賓等熱帶地區，其果實具有抗炎、抗氧化、抗真菌、抗病毒、抗腫瘤以及免疫調節作用。面包樹果實凝集素（frutalin，FTL）是從面包果籽中分離出的糖蛋白，具有四聚體結構。面包樹果實凝集素的氨基酸序列、結構以及糖結合特異性等與Jacalin家族中第一個被發現的半乳糖結合凝集素A. integrifolia seeds—jackfruit的極其相似，經證實屬于Jacalin家族。在功能性質方面，面包樹果實凝集素與Jacalin也表現出相似性，然而由于面包樹果實凝集素擁有高強度的凝血活性，相較于jackfruit，它的生物學活性更顯著。研究表明，面包樹果實凝集素是一種能夠引起免疫調節的植物凝集素，可以作為腫瘤標志物，在生物醫學應用中越來越受到人們的關注。

目前，面包樹果實凝集素的提取主要是對果實籽進行打漿、離心、濃縮而得，由于提取工藝粗糙，導致面包樹果實凝集素的提取率和純度均較低。

發明內容

本發明意在提供一種面包樹果實凝集素的提取方法，以實現較高的面包樹果實凝集素提取率和純度。

本方案中的一種面包樹果實凝集素的提取方法，包括以下步驟：

（1）原料制備：從新鮮的面包樹果實中取果實籽，得新鮮原料；

（2）打漿：在新鮮原料中加入Tris-HCl緩沖液，經勻漿機打碎得漿狀原料；

（3）熱水浴浸提：在40～90℃的條件下對漿狀原料浸提1～2h，浸提后過濾得濾液；

（4）第一次離心：在4000～8000r/min的條件下對濾液離心處理15～30min，然后取上清液；

（5）硫酸銨沉淀目的蛋白：在上清液中加入硫酸銨至飽和度為60～100％，靜置2～8h得懸濁液；

（6）第二次離心：在4000～8000r/min的條件下對懸濁液離心處理15～30min，棄上清液，沉淀用Tris-HCl緩沖液重懸，得面包樹果實凝集素粗品。

本方案的工作原理及其有益效果：