[發明專利]一種對硝基芐醇丙二酸單酯的生物制備方法有效
| 申請號： | 201711326065.5 | 申請日： | 2017-12-13 |
| 公開（公告）號： | CN108060186B | 公開（公告）日： | 2020-08-28 |
| 發明（設計）人： | 楊仲毅;鐘永軍;何昕蔚;羅希;蔣晶晶;余達勇 | 申請（專利權）人： | 臺州學院 |
| 主分類號： | C12P13/00 | 分類號： | C12P13/00 |
| 代理公司： | 上海申浩律師事務所 31280 | 代理人： | 賈師英 |
| 地址： | 318000 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 硝基 芐醇丙二酸單酯 生物 制備 方法 | ||
1.一種制備對硝基芐醇丙二酸單酯的方法，包括如下步驟：
以2-氰基乙酸-(4-硝基苯基)甲酯為底物，用腈水解酶或者其表達微生物、和酰胺酶或者其表達微生物進行聯合催化而得，所述腈水解酶的氨基酸序列為SEQ ID NO:1，所述酰胺酶的氨基酸序列為SEQ ID NO:2。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述微生物是大腸桿菌。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟為：以2-氰基乙酸-(4-硝基苯基)甲酯為底物，用表達腈水解酶SEQ ID NO:1的大腸桿菌和表達酰胺酶SEQ ID NO:2的大腸桿菌進行聯合催化而得。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，反應體系為pH 3.0～8.0的緩沖溶液體系，其中緩沖溶液為Tris-HCl緩沖液、KH2PO4/K2HPO4緩沖液或者乙酸鈉緩沖液。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，反應體系中添加有底物助溶劑，所述底物助溶劑選自甲醇、乙醇、二甲基亞砜、乙酸乙酯、丙酮、丁酮、正已烷、正戊烷、環已烷或者它們兩種以上的混合物。
6.如權利要求4所述的方法，其特征在于，反應體系中底物2-氰基乙酸-(4-硝基苯基)甲酯的加入量為0.5～100g/L。
7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，反應體系中底物的加入量為5～60g/L。
8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，反應體系中底物是一次性加入或者分批加入。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，反應體系的反應溫度為20～40℃。
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