[發明專利]一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201711325927.2
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN107753465B
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 南開輝;林森;謝佩玲;羅夢夢;李彤
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/36;A61K47/61;A61K47/64;A61K31/704;A61K31/12;A61P35/00
• 代理公司: 33237 溫州金甌專利事務所(普通合伙)
• 代理人: 王堅強

一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法及應用，用腫瘤組織高表達Legumain的生物學特性，制備Legumain響應的納米凝膠，從而實現對腫瘤組織的雙重靶向效應（主動靶向和被動靶向），減少阿霉素對正常組織的次生傷害，本發明制備的納米制劑能使藥物和抑制劑先后釋放功能，進入細胞后，抑制劑先從載體中釋放，占據耐藥蛋白活性位點，再使藥物釋放，這樣就能最大程度減少藥物外排，逆轉多耐藥性。

技術領域

本發明涉及納米藥物技術領域，具體涉及一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法及應用。

背景技術

產生副作用和腫瘤組織產生多耐藥性是化學藥物治療失敗的兩大因素。阿霉素是一種常用的光譜抗腫瘤化學藥物，然而，阿霉素作為一種強細胞毒性藥物，對正常組織（如心臟、肝、腎以及腫瘤周圍正常組織等）帶來不可逆轉的傷害。如何實現藥物靶向腫瘤組織，減少對正常組織的次生傷害，是惡性腫瘤藥物治療中的一大難點。由于惡性腫瘤組織具有“滲透和滯留增強效應”，納米尺度下的藥物-載體體系能夠透過腫瘤組織的新生血管壁而不能透過正常組織的血管壁，達到“被動靶向”腫瘤組織效果，增強藥物在腫瘤組織的聚集，從而減少對正常組織的傷害。然而，大量的研究表明這種僅僅依靠“被動靶向”效應，在實踐中往往很難達到實際需要的靶向效率。利用腫瘤組織自身及其微環境的生物學特性（如低PH值，高還原勢，過表達葉酸受體等），制備環境因子響應型納米藥物載體，達到對腫瘤組織“主動”和“被動”雙重或多重靶向效應，能夠極大提高藥物在腫瘤組織中的聚集，從而提高藥物治療的效果。Legumain是哺乳動物中唯一的特異性水解天冬酰胺殘基的酶，研究表明Legumain在許多惡性腫瘤及腫瘤相關細胞中高表達，可作為惡性腫瘤藥物靶向設計的新靶點。以往利用腫瘤組織高表達Legumain蛋白酶特性的藥物緩釋體系包括將藥物與Legumain底物肽段直接相連，并在肽段另一端連接細胞膜不透性因子，從而使藥物只能Legumain高活性的腫瘤組織中才能透過細胞。但這種設計的產物仍然是小分子藥物，不具有納米尺度下藥物-載體體系的被動靶向效應，也不具有緩釋效果。

同時，藥物處理后，產生耐藥性，進一步降低藥物的療效。多數研究認為，高表達耐藥蛋白（一種將藥物排出細胞的跨膜蛋白）是腫瘤產生耐藥性的主要原因之一。研究表明，姜黃素具有抑制耐藥蛋白的作用。共包載姜黃素和抗癌藥物可以顯著增強藥物的抗癌活性。但是，目前所用的共包載體系同時釋放抗癌藥物和耐藥蛋白抑制劑（如姜黃素），這樣會導致抗癌藥物與耐藥蛋白抑制劑競爭耐藥蛋白的活性位點，從而導致部分藥物外排。

發明內容

針對現有技術的缺點，本發明提供了一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法及應用。

本發明采用的技術解決方案是：一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法，包括以下步驟：

（1）阿霉素的多肽衍生物合成：

A、稱取阿霉素鹽酸溶液（Dox·HCl） 1mmol和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）溶于50ml的DMF，加入N，N-二異丙基乙胺（DIPEA）2mmol，磁力攪拌，加入HATU溶液，室溫避光攪拌，然后將反應置于-20℃條件下使反應停止，透析袋內透析，產物冷凍干燥，得到DOX-PEP-NH-Fmoc產物；

B、將A步驟中得到的產物加二氯甲烷溶解，加入20% 哌啶室溫攪拌5min，迅速置于冷卻液中，加丁二酸酐，待顏色變化后放置于室溫反應10 min，40 ℃旋干，加乙醚， 10000r/min離心10min，去除DOX-PEP-NH-Fmoc產物的Fmoc保護基團，調節PH值至6.95，并用透析袋內透析去除小分子副產物，冷凍干燥，制備得到DOX-PEP-CONH-CH₂-CH₂-COOH；

（2）殼聚糖（CS）阿霉素多肽衍生物納米粒子制備：