[發明專利]一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201711325927.2
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN107753465B
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 南開輝;林森;謝佩玲;羅夢夢;李彤
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/36;A61K47/61;A61K47/64;A61K31/704;A61K31/12;A61P35/00
• 代理公司: 33237 溫州金甌專利事務所(普通合伙)
• 代理人: 王堅強

1.一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）阿霉素的多肽衍生物合成：

A、稱取阿霉素鹽酸溶液（Dox?HCl） 1mmol和Fmoc-A-A-N(Trt)-L-OH（PEP）溶于50ml的DMF，加入N，N-二異丙基乙胺（DIPEA）2mmol，磁力攪拌，加入HATU溶液，室溫避光攪拌，然后將反應置于-20±5℃條件下使反應停止，透析袋內透析，產物冷凍干燥，得到DOX-PEP-NH-Fmoc產物；

B、將A步驟中得到的產物加二氯甲烷溶解，加入20% 哌啶室溫攪拌5±1 min，迅速置于冷卻液中，加丁二酸酐，待顏色變化后放置于室溫反應10 ±1min，40 ℃旋干，加乙醚，10000 r/min離心10±1min，去除DOX-PEP-NH-Fmoc產物的Fmoc保護基團，調節PH值至6.95±0.5，并用透析袋內透析去除小分子副產物，冷凍干燥，制備得到DOX-PEP-CONH-CH₂-CH₂-COOH；

（2）殼聚糖（CS）阿霉素多肽衍生物納米粒子制備：

a、稱取DOX-PEP-CONH-CH₂-CH₂-COOH溶于DMF中，超聲5±1min，加入EDC和DMAP,震蕩混勻，超聲10±1min，將混合溶液在磁力攪拌下逐漸滴加到含CS的MES溶液中，常溫過夜反應，用透析袋透析，干燥稱量得到DOX-PEP-CS；

b、取DOX-PEP-CS溶于1%醋酸中，超聲，加入環己烷，正辛醇和Triton X100混合，用高速勻質機操作5±1min,靜置，加入京尼平溶液，繼續超聲10±1min，反應24h；

將交聯后加入丙酮，混勻，離心機離心10±1min，去上清，重復此操作3遍，收集沉淀，加入三氟乙酸、二氯甲烷、三異丙基硅烷反應去除三苯甲基氨基保護基團，旋蒸去除二氯甲烷，三氟乙酸，后加水復溶，將產物裝入透析袋，超純水透析；

（3）共包載姜黃素：姜黃素用DMSO溶解，緩慢滴加至CS-PEP-DOX納米粒子溶液中，透析去除未包載藥物和DMSO，即得所述的Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑。

2.根據權利要求1所述的一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟A、B中內透析的透析袋的COMW=100-500。

3.根據權利要求1所述的一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟a、b中內透析的透析袋的COMW=14000。

4. 根據權利要求1所述的一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟b中加入的京尼平溶液的量為0.05-0.3 mmol。

5.根據權利要求1所述的一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟b中離心機離心轉速為10000r/min。

6. 根據權利要求1所述的一種Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟b中加入的三氟乙酸為20 mL、二氯甲烷為20 mL、三異丙基硅烷為800 uL。

7.一種權利要求1所述的制備方法制備的Legumain響應分步釋放阿霉素/姜黃素緩釋的納米制劑在制備逆轉腫瘤多耐藥性藥物的應用。