[發明專利]一種檢測辣椒脈斑駁病毒專用引物及其檢測方法

有效

• 申請號: 201711325020.6
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN107937609B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 楊彩霞;高芳鑾;付晶晶;韓彤;廖一鳴;李梁;侯秋實;石長玉
• 申請（專利權）人: 沈陽大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 沈陽技聯專利代理有限公司 21205
• 代理人: 趙越

一種檢測辣椒脈斑駁病毒專用引物及其檢測方法，涉及一種檢測病毒引物及其檢測方法，檢測辣椒脈斑駁病毒所用到的PCR引物具體為：上游引物：ChiVMV?CP?F：如SEQ ID NO.1所示，即，5’?GCACCATACATTTCAGAAACAGC?3’，下游引物：ChiVMV?CP?R：如SEQ ID NO.2所示，即，5’?GAACCACACTGAAGAATATGRATG?3’。本發明所提供的PCR引物對ChiVMV的檢出具有通用性，不僅能檢測出龍葵樣品中的ChiVMV，還可以檢測到番茄樣品中的ChiVMV。在檢測過程中利用RT?PCR手段，具有靈敏性高、操作簡便等特點。實驗表明，利用本發明檢測龍葵和番茄上的辣椒脈斑駁病毒（ChiVMV），有較高的特異性。

技術領域

本發明涉及一種檢測病毒引物及其檢測方法，特別是涉及一種檢測辣椒脈斑駁病毒專用引物及其檢測方法。

背景技術

辣椒脈斑駁病毒（Chilli veinal mottle virus, ChiVMV），是Potyvirus的確定種，長約900nm，基因組為單鏈正義RNA，5’-端具有一個共價結合基因組連接蛋白(viralprotein genome-linked, VPg)，3’-端為20-160nt個腺苷酸組成的Poly(A)尾巴。基因組編碼一個350 kDa的多聚蛋白(Polyprotein)，隨后切割成解旋酶、復制酶和衣殼蛋白等8~10個蛋白參與病毒的復制、運動和包裝。ChiVMV的傳播主要通過蟲媒的形式以非持久性進行傳播。ChiVMV在亞洲危害嚴重，給越南、泰國、印度、巴基斯坦、韓國和中國的辣椒產業帶來重創。在我國，ChiVMV在海南島和臺灣多地的辣椒和番茄上危害。ChiVMV侵染初期會誘導寄主植物表現為葉脈產生深色條紋、葉肉組織皺縮或葉面畸形等癥狀。后期則產生落花落果、果實畸形等癥狀。給我國辣椒和番茄的生產造成了重大的經濟損失。

病毒病害的快速檢測為病害控制提供了先決條件。目前，最普遍的分子檢測手段是聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction , PCR）。該技術是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。利用PCR擴增技術對植物病毒進行檢測具有靈敏性和高效性等特點，由于其對任何材料、甚至含量很低的樣品都能進行檢測，因此被廣泛應用于生物學研究的各個領域。

RT-PCR（reverse transcription-Polymerase Chain Reaction , RT-PCR）反轉錄聚合酶鏈式反應，在引物的作用下，先對RNA樣品進行cDNA合成，在進行擴增。這種方法擁有高靈敏度、強轉移性等特點。

PCR擴增或者RT-PCR擴增的首要條件是有一對已知引物。引物的設計涉及到長度、G+C含量、引物自身配對、引物二聚體、3’末端和特異性等情況。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測辣椒脈斑駁病毒專用引物及其檢測方法，本發明提供一種檢測辣椒脈斑駁病毒所用PCR引物，并以此引物為基礎提供了一種龍葵和番茄中辣椒脈斑駁病毒（ChiVMV）的檢測方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種檢測辣椒脈斑駁病毒專用引物，所述一種檢測辣椒脈斑駁病毒所用到的PCR引物具體為：

上游引物：ChiVMV-CP-F：如SEQ ID NO.1 所示，即，5’-GCACCATACATTTCAGAAACAGC-3’，

下游引物：ChiVMV-CP-R：如SEQ ID NO.2 所示，即，5’-GAACCACACTGAAGAATATGRATG-3’。