[發(fā)明專利]一種通過PCR技術(shù)判定土豆是否輻照的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711324950.X
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN108130361B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉綿學(xué);黃敏;伏毅;王艷;瞿攀
• 申請（專利權(quán)）人: 四川省原子能研究院
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 成都天嘉專利事務(wù)所(普通合伙) 51211
• 代理人: 史姣姣

本發(fā)明提供一種通過PCR技術(shù)判定土豆是否輻照的方法，其首先提取未輻照以及待測土豆的DNA樣本，使用4對鑒別引物對DNA樣本進(jìn)行實(shí)時定量PCR的Livak分析，獲得DNA片段組合間倍數(shù)關(guān)系，通過兩種鑒別標(biāo)準(zhǔn)鑒別樣本是否符合輻照損傷特征；然后使用2對引物對符合輻照特征的DNA樣本進(jìn)行實(shí)時PCR分析，獲得DNA片段組合間倍數(shù)的對數(shù)，通過兩種判定標(biāo)準(zhǔn)判定待測土豆樣本是否經(jīng)過輻照處理，最終實(shí)現(xiàn)對土豆的定性輻照鑒定。與“彗星DNA法”相比，可提高輻照食品定性鑒定的靈敏度和結(jié)果可靠性，對輻照食品生產(chǎn)和輻照加工企業(yè)的質(zhì)量安全控制、食品安全監(jiān)督部門、進(jìn)出口檢驗檢疫部門食品輻照鑒定業(yè)務(wù)均有可行性和重要的應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品輻照檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種通過PCR技術(shù)判定土豆是否輻照的方法。

背景技術(shù)

關(guān)于食品的定性輻照鑒定技術(shù)，是指判定食品樣本其是否經(jīng)過輻照處理的多種檢測方法。輻照處理可殺滅食品內(nèi)的有害微生物，抑制其發(fā)芽過程，延長食品貨架期；另一方面，需輻照食品未經(jīng)過有效輻照或輻照劑量超出安全質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，會造成食品品質(zhì)下降，對消費(fèi)者健康造成威脅。隨著全球范圍內(nèi)輻照食品及輻照加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，消費(fèi)者對食品安全需求不斷提升，對輻照食品鑒定技術(shù)的可靠性要求愈發(fā)凸顯。目前實(shí)際應(yīng)用中的輻照食品鑒定技術(shù)按原理可劃分為物理方法、化學(xué)方法和生物方法三類。物理方法主要包括電子自旋共振(ESR)法、熱釋光(TL)法、光釋光(PSL)法等；化學(xué)方法主要包括揮發(fā)性碳?xì)浠衔锓ā⑦^氧化值法、超臨界流體抽取法、LC-MS及GC-MS聯(lián)用檢測技術(shù)等；生物方法主要包括了直接表面熒光過濾技術(shù)/平板計數(shù)(DEFT/APC)法，基于“DNA變異”原理的彗星DNA法等。這種輻照食品鑒定方法多種并存的狀況，是因為各種檢測技術(shù)對測試樣本的范圍限制嚴(yán)格，尚不存在一種可對所有輻照食品實(shí)現(xiàn)定性或定量檢測的通用方法。以我國最新頒布(2017年6月)的輻照食品鑒定國標(biāo)為例：1)GB 21926-2016(含脂類輻照食品鑒定2-十二烷基環(huán)丁酮的氣相色譜-質(zhì)譜分析法)、2)GB 31642-2016(輻照食品鑒定電子自旋共振波譜法)、3)GB31643-2016(含硅酸鹽輻照食品的鑒定熱釋光法)、4)GB 23748-2016(輻照食品鑒定篩選法)，GB 21926-2016針對一種2-十二烷基環(huán)丁酮檢測，適用于脂肪含量大于1％的輻照食品；GB 31642-2016適用于輻照含纖維素食品和含骨食品的鑒定,涉及產(chǎn)品包括干果、香辛料、新鮮水果蔬菜、谷物和含骨動物產(chǎn)品等；GB 31643-2016適用于可分離硅酸鹽的香辛料、脫水蔬菜、新鮮水果和蔬菜等食品；GB 23748-2016中的DNA彗星試驗法適用于動物產(chǎn)品、谷物、堅果、果蔬的輻照鑒定，但僅能對輻照樣本進(jìn)行輔助篩選，無法定性，也無法定量鑒定。

由于生鮮食品中DNA核酸含量充裕，且固定物種的總DNA中特定片段間的分布數(shù)量相對穩(wěn)定，DNA變異法發(fā)展?jié)摿?shí)際非常巨大。但相較于物理和化學(xué)輻照鑒定方法的迅速發(fā)展，生物方法的研究相對滯后。我國現(xiàn)行國標(biāo)采用的彗星DNA檢測技術(shù)中，將單個細(xì)胞內(nèi)的核酸染色體作為檢測對象，將DNA斷裂片段的形態(tài)觀測作為結(jié)果進(jìn)行判斷分析，只能進(jìn)行待測樣本的輔助篩選，不能認(rèn)定樣本是否輻照，必須和其他方法結(jié)果聯(lián)合判定，更無法做到定量評估。該方法的另一個不足是無法排除加熱或其他條件造成的假陽性結(jié)果，若食品中大量存在的天然細(xì)胞殘核及細(xì)胞膜不完全溶解時，會對結(jié)果造成嚴(yán)重干擾。

綜合以上情況，為改良“彗星DNA法”原有輻照鑒定技術(shù)的不足之處，有必要且亟需研發(fā)更為可靠的鑒定技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種通過PCR技術(shù)判定土豆是否輻照的方法，包括下述步驟：

A、提取樣本總DNA：

取同一批次的未輻照土豆樣本、待檢土豆樣本至少各三個，分別提取未輻照土豆樣本總DNA和待檢土豆樣本總DNA；

B、獲取未輻照土豆樣本總DNA中待檢測核酸片段之間分布數(shù)量的相對倍數(shù)的對數(shù)的平均數(shù)：