[發(fā)明專利]一種檢測miRNA-122的電化學(xué)生物傳感器

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711324299.6
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN108169311B
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃加棟;裴倩倩;王玉;劉素
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682;C12Q1/6825;G01N27/48;G01N27/327
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 李桂存

1.一種檢測miRNA-122的電化學(xué)生物傳感器，其特征在于，包括發(fā)卡探針1 (HAP1)、ExoIII酶、金電極和修飾于金電極表面的發(fā)卡探針2 (HAP2)- 輔助探針；

所述HAP1的序列如SEQ No. 1所示；

所述HAP2的序列如SEQ No. 2所示，其5’端修飾二茂鐵，3’端修飾巰基；

所述發(fā)卡探針2通過Au-S鍵修飾于金電極表面；

輔助探針的序列如SEQ No. 3所示，其5’端修飾亞甲基藍(lán)；所述輔助探針通過與發(fā)卡探針2雜交修飾于金電極表面。

2.一種利用如權(quán)利要求1所述的電化學(xué)生物傳感器檢測miRNA-122的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）金電極拋光處理；

（2）將HAP2溶液滴加于金電極表面，37 ℃恒溫孵育；然后再滴加輔助探針溶液，37 ℃恒溫孵育；

（3）將HAP1、ExoIII酶與miRNA-122的標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測液混合，37 ℃恒溫孵育；

（4）將步驟（3）的反應(yīng)液滴加到步驟（2）所得的電極上，37 ℃恒溫孵育；然后漂洗；

（5）以Ag/AgCl為參比電極，以Pt電極為對電極，以步驟（4）所得金電極為工作電極，采用差分脈沖伏安法檢測讀取電信號的變化；

（6）根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的電流變化作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，由待測液的電流變化，計(jì)算待測液中miRNA-122的濃度。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述拋光處理為將金電極依次在0.3 μm和0.05 μm的氧化鋁漿中進(jìn)行拋光至鏡面。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（2）的HAP2和輔助探針的摩爾比為1:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（5）中，電位設(shè)置為0到-0.5 V，脈沖寬度0.05 V，掃描速率0.06 s。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述HAP1的濃度為0.1-2 μM；所述HAP2的濃度為1-20 μM；所述ExoIII酶的濃度為5-30 U/μL。