[發(fā)明專利]一種多肽螯合金屬離子的合成方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711321987.7
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN108070019A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳為光;鄭范娜;武興偉;嚴(yán)磊
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽省國平藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C07K5/097
• 分類號: C07K5/097;C07K1/04;C07K1/06;C07K1/107
• 代理公司: 北京和信華成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11390
• 代理人: 胡劍輝

本發(fā)明公開了一種多肽螯合金屬離子的合成方法，包括以下步驟：多肽?2?ClResin的合成、多肽?2?Cl Resin的切割純化以及多肽金屬離子的螯合反應(yīng)；實驗改進(jìn)了常規(guī)的化學(xué)合成法，引入創(chuàng)新型技術(shù)，通過真空螯合反應(yīng)、離心沉降除雜，得到多肽螯合亞鐵離子純品多肽；得到的目標(biāo)純品螯合肽的收率為72.2％(實測樹脂取代度為0.4mmol/g)，與現(xiàn)有技術(shù)僅30?50％的收率相比較，產(chǎn)品收率有大幅度地提高，并且產(chǎn)品生產(chǎn)周期也大為縮短。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多肽產(chǎn)品的合成制備方法，特別涉及一種多肽螯合金屬離子的合成方法。

背景技術(shù)

一些金屬元素尤其是微量元素對人體具有明顯的營養(yǎng)作用和生理功能，對維持機(jī)體的生長、發(fā)育、繁衍等生命活動必不可少，它們的需求量雖小卻與機(jī)體健康和疾病有著密切關(guān)系。目前世界范圍內(nèi)人們普遍存在缺鐵、缺鈣等現(xiàn)象，因此開發(fā)適宜的金屬元素補充劑具有重要現(xiàn)實意義。多肽亞鐵離子螯合物是通過多肽的N端氨基、C端氨基、氨基酸側(cè)鏈以及肽鏈中的羰基和亞氨基與金屬離子配位形成的一種生物活性物質(zhì)，可以直接被腸粘膜細(xì)胞吸收，不產(chǎn)生任何消化道刺激癥狀，生物利用率高，是理想的補鐵劑。

目前市場上報道的多肽螯合金屬離子的合成方法主要有溶劑提取法，酶解法，化學(xué)合成法等。溶劑提取法制備多肽進(jìn)而螯合金屬離子不僅成本高，而且存在化學(xué)物質(zhì)殘留等安全性問題，而酶解法操作過程復(fù)雜，周期長，不易規(guī)模化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種多肽螯合金屬離子的合成方法，該合成方法螯合收率高、工藝簡單周期短、成本低，具有廣泛的市場應(yīng)用前景。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種多肽螯合金屬離子的合成方法，包括以下步驟：

S1、多肽-2-Cl Resin的合成：

以樹脂為固相載體，添加保護(hù)酸、縮合劑和活化劑到多肽合成反應(yīng)器中，按照多肽肽鏈順序依次縮合氨基酸，再經(jīng)脫保護(hù)和洗滌后，即得到如下的多肽-2-Cl Resin：

Fmoc-His(Trt)-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin；

S2、多肽-2-Cl Resin的切割純化：

向步驟S1得到的多肽-2-Cl Resin中加入切割試劑進(jìn)行切割反應(yīng)，接著加入沉降試劑進(jìn)行沉降，沉降后得到粗品多肽經(jīng)純化即得純品多肽-2-Cl Resin；

S3、多肽金屬離子的螯合反應(yīng)

向純品多肽-2-Cl Resin中加入抗氧化劑和金屬離子源，進(jìn)行螯合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后產(chǎn)品經(jīng)洗滌、離心沉降、凍干，得到多肽螯合金屬離子的純品多肽。

進(jìn)一步，步驟S1中所述的樹脂為2-Cl樹脂，2-Cl樹脂取代度為0.9～1.1mmol/g。

進(jìn)一步，步驟S1中所述的保護(hù)酸Fmoc-保護(hù)酸，F(xiàn)moc-保護(hù)氨基酸依次為：Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，縮合反應(yīng)溫度為28℃。

進(jìn)一步，步驟S1中所述的依次縮合氨基酸的順序為Fmoc-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合、Fmoc-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合和Fmoc-His(Trt)-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合。

進(jìn)一步，所述的Fmoc-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合中采用的縮合劑和活化劑為HOBT/DIEA；Fmoc-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合和Fmoc-His(Trt)-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合中采用的縮合劑和活化劑分別為HOBT/DIC。