[發明專利]一種多肽螯合金屬離子的合成方法

在審

• 申請號: 201711321987.7
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN108070019A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 陳為光;鄭范娜;武興偉;嚴磊
• 申請（專利權）人: 安徽省國平藥業有限公司
• 主分類號: C07K5/097
• 分類號: C07K5/097;C07K1/04;C07K1/06;C07K1/107
• 代理公司: 北京和信華成知識產權代理事務所(普通合伙) 11390
• 代理人: 胡劍輝

1.一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1、多肽-2-Cl Resin的合成：

以樹脂為固相載體，添加保護酸、縮合劑和活化劑到多肽合成反應器中，按照多肽肽鏈順序依次縮合氨基酸，再經脫保護和洗滌后，即得到如下的多肽-2-Cl Resin：

Fmoc-His(Trt)-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin；

S2、多肽-2-Cl Resin的切割純化：

向步驟S1得到的多肽-2-Cl Resin中加入切割試劑進行切割反應，接著加入沉降試劑進行沉降，沉降后得到粗品多肽經純化即得純品多肽-2-Cl Resin；

S3、多肽金屬離子的螯合反應：

向純品多肽-2-Cl Resin中加入抗氧化劑和金屬離子源，進行螯合反應，反應結束后產品經洗滌、離心沉降、凍干，得到多肽螯合金屬離子的純品多肽。

2.根據權利要求1所述的一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：步驟S1中所述的樹脂為2-Cl樹脂，2-Cl樹脂取代度為0.9～1.1mmol/g。

3.根據權利要求1所述的一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：步驟S1中所述的保護酸Fmoc-保護酸，Fmoc-保護氨基酸依次為：Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，縮合反應溫度為28℃。

4.根據權利要求1所述的一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：步驟S1中所述的依次縮合氨基酸的順序為Fmoc-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合、Fmoc-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合和Fmoc-His(Trt)-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合。

5.根據權利要求5所述的一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：所述的Fmoc-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合中采用的縮合劑和活化劑為HOBT/DIEA；Fmoc-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合和Fmoc-His(Trt)-Tyr(tBu)-Asp(otBu)-2-Cl Resin的縮合中采用的縮合劑和活化劑分別為HOBT/DIC。

6.根據權利要求1所述的一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：步驟S1中所述的脫保護選用20％哌啶/DMF為脫保護劑，脫保護劑的加入量為多肽合成反應器體積的1/3～1/2。

7.根據權利要求1所述的一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：步驟S2中所述的切割試劑為體積比為DCM：TFE＝4:1的混合溶液，切割反應時間為30min；所述的沉降試劑為-20℃低溫預冷的低溫乙醚。

8.根據權利要求1所述的一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：步驟S2中所述的純化采用反相高效液相色譜法制備純化；所述的反相高效液相色譜法制備純化的條件為：色譜柱選用粒徑為10um的C18制備柱，以A相：0.1％TFA水溶液，B相：0.1％TFA乙腈溶液為流動相，按照如下的梯度程序進行多肽的分離提純：

9.根據權利要求1所述的一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：步驟S3中所述的抗氧化劑為1％的抗壞血酸；所述的金屬離子源為氯化亞鐵。

10.根據權利要求1所述的一種多肽螯合金屬離子的合成方法，其特征在于：步驟S3中所述的螯合反應環境為真空環境，螯合反應時間為30-40min；螯合溫度反應為30℃，所述的洗滌的溶劑為無水乙醇。