[發(fā)明專利]暗黑鰓金龜內(nèi)參基因及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711321016.2
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN108103203B
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鞠倩;曲明靜;李曉;姜曉靜;杜龍;楊珍;江晨;李建文;曾慶朝
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省花生研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 山東三邦知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37308
• 代理人: 肖太升;牛繼梅

1.一種暗黑鰓金龜內(nèi)參基因，其特征在于，所述內(nèi)參基因為真核肽鏈釋放因子3(eRF3)，eRF3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的暗黑鰓金龜內(nèi)參基因，其特征在于，所述內(nèi)參基因序列由轉(zhuǎn)錄組測序獲得，并進行驗證，驗證方法如下：以暗黑鰓金龜成蟲全身總RNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA為模板，以如下引物對進行PCR擴增并測序；

內(nèi)參基因eRF3對應(yīng)的引物對為：正向引物5'-ATTGTGCCGCTGAAGAGGTT-3'，反向引物5'-CTTTCCGATGGCGATTGTT-3'。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的暗黑鰓金龜內(nèi)參基因，其特征在于，所述PCR擴增反應(yīng)程序為：

94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s，35個循環(huán)；最后72℃下延伸8min。

4.一種暗黑鰓金龜內(nèi)參基因真核肽鏈釋放因子3實時熒光定量PCR引物，其特征在于，以權(quán)利要求1所述的內(nèi)參基因核苷酸序列為基礎(chǔ)，利用PrimerPremier5.0軟件、并遵循實時熒光定量PCR引物設(shè)計的原則設(shè)計出一對熒光定量特異引物，該對熒光定量特異引物即為所述實時熒光定量PCR引物；

所述引物序列為：正向引物5'-AATGCCGTGGTTCAAAGGATGG-3'，反向引物5'-TAGCGTGATCGTCCATCTGTG-3'。

5.如權(quán)利要求4所述的實時熒光定量PCR引物在分析暗黑鰓金龜不同組織部位及不同發(fā)育時期基因表達模式的實時熒光定量PCR實驗中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述實時熒光定量PCR擴增反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性3min；95℃10s，58℃30s，共40個循環(huán)；58℃到95℃，每個循環(huán)上升0.5℃。