[發(fā)明專利]一種蛋白藥物的發(fā)酵生產(chǎn)工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711320516.4
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN109913483A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張英豪;李小靈;孫榮勛;宛佳;高海源;付晶鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 上海清流生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/12;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10;C07K14/47;C12P21/02
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 陳劍聰

本發(fā)明公開了一種蛋白藥物的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其適合產(chǎn)業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)sDSS1蛋白藥物，步驟包括：首先利用基因工程手段將sDSS1基因片段整合到表達(dá)質(zhì)粒，整合基因片段中包含純化標(biāo)簽；表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)轉(zhuǎn)化進(jìn)入相應(yīng)的表達(dá)宿主，構(gòu)建高表達(dá)重組工程細(xì)胞；重組工程細(xì)胞經(jīng)發(fā)酵、誘導(dǎo)表達(dá)、裂解、復(fù)性、酶切獲得粗純蛋白；繼續(xù)進(jìn)行一系列精細(xì)純化步驟獲得高純度的sDSS1蛋白。本工藝經(jīng)濟(jì)有效。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種蛋白藥物的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，屬于蛋白藥物產(chǎn)業(yè)化制備技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

大規(guī)模且經(jīng)濟(jì)地獲得高度純化的目的蛋白對于生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)來說是一個重要的課題。通常，天然提取的活性蛋白更加直接有效，但是受原料、蛋白豐度、純化工藝等因素限制，天然提取的蛋白往往并不經(jīng)濟(jì)高效。對于常規(guī)蛋白藥物，包括激素、疫苗、抗體、多肽等，利用哺乳動物細(xì)胞、細(xì)菌、酵母菌等大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)提供了一個更加經(jīng)濟(jì)高效的途徑，并且極大地降低了藥物成本。但是，對于活性蛋白，由于蛋白質(zhì)本身易于發(fā)生反應(yīng)，無論是發(fā)酵生產(chǎn)的表達(dá)效率和蛋白質(zhì)純化的效率都受到顯著的影響。要將所需的活性蛋白質(zhì)與細(xì)胞裂解液或發(fā)酵液進(jìn)行分離純化，達(dá)到足夠臨床使用的純度和安全標(biāo)準(zhǔn)，并且盡可能的降低成本，這些是目前產(chǎn)業(yè)界面臨的難題。

Shfm1(split hand/split foot malformation type 1)基因是人蟹爪病中的關(guān)鍵基因之一，進(jìn)化上高度保守，它所編碼的蛋白DSS1參與到穩(wěn)定基因組、同源基因重組、DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞增殖等過程[1-4]。本專利發(fā)明人的研究結(jié)果顯示DSS1蛋白作為標(biāo)簽可以通過耗能的酶促反應(yīng)添加到氧化蛋白上，幫助細(xì)胞清除氧化蛋白[5]。這些結(jié)果顯示DSS1蛋白在生物活動中的重要作用。sDSS1蛋白是最新發(fā)現(xiàn)的DSS1蛋白亞型，二者在氨基酸序列上有部分相似性，但是多肽結(jié)構(gòu)完全不同。作為一種新型天然蛋白，sDSS1在氨基酸序列和多肽結(jié)構(gòu)上的差異決定了它的功能更加特殊，因而有更大的潛在應(yīng)用價值。目前尚未有資料報道針對sDSS1蛋白的發(fā)酵生產(chǎn)工藝。

以上內(nèi)容涉及的引文：

1.Van Silfhout AT,van den Akker PC,Dijkhuizen T,Verheij JB,Olderode-Berends MJ,Kok K,Sikkema-Raddatz B,van Ravenswaaij-Arts CM(2009)Split hand/foot malformation due to chromosome 7q aberrations(SHFM1):additional supportfor functional haploinsufficiency as the causative mechanism.EurJ Hum Genet17(11):1432-8.

2.Li J,Zou C,Bai Y,Wazer DE,Band V,Gao Q(2006)DSS1is required for thestability of BRCA2.Oncogene 25:1186–1194.

3.Liu J,Doty T,Gibson B,Heyer WD(2010)Human BRCA2protein promotesRAD51filament formation on RPA-covered singlestranded DNA.Nat Struct Mol Biol17:1260–1262.

4.Zhou Q,Kojic M,Cao Z,Lisby M,Mazloum NA,Holloman WK(2007)Dss1interaction with Brh2as a regulatory mechanism for recombinationalrepair.Mol Cell Biol 2:2512–2526.