[發明專利]一種環孢菌素H的分離純化方法

有效

• 申請號: 201711318491.4
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN108148118B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 陳秀明;樂占線;江莉
• 申請（專利權）人: 陳秀明
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 林祥翔;黃以琳

1.一種環孢菌素H的分離純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

待分離液的制備：將環孢菌素H含量10%以上的環孢菌素H粗品溶解于極性溶劑，過濾后得到含環孢菌素H的溶液，按溶液體積比15-25%加入水進行攪拌稀釋，制成待分離液；

上樣：將待分離液上樣層析柱，形成含有環孢菌素H的層析柱；所述層析柱的制備包括：將苯基氨基甲酸酯化β-環糊精硅膠用甲醇浸泡后裝柱，再用體積百分比濃度35-40%的極性溶劑平衡層析柱；

洗脫：用洗脫液對層析柱進行梯度洗脫，所述洗脫液中含有質量百分比為0.1%的甲酸或乙酸，所述洗脫液中極性溶劑的體積百分比濃度由35-40%逐步提高至45-50%，洗脫流速為每小時3-5個柱體積，用HPLC進行跟蹤監測，收集環孢菌素H含量95%以上的洗脫液；

濃縮結晶：將洗脫步驟中收集的環孢菌素H含量95%以上的洗脫液進行濃縮，濃縮后產物用乙酸乙酯進行萃取，并取上相萃取液減壓濃縮后得到稠狀濃縮物，稠狀濃縮物加入丙酮溶解過濾后，再依次加入甲基叔丁基醚和去離子水，最后逐步加入正己烷至溶液中出現白色不溶物后，降溫至4℃，析出白色固體；

干燥：過濾濃縮結晶步驟中析出的白色固體，將白色固體在40-60℃下進行干燥，得到環孢菌素H成品；

所述環孢菌素H粗品中含有環孢菌素A；

所述待分離液的制備步驟中，所述環孢菌素H粗品與所述極性溶劑的重量比為1：8-12；

所述上樣步驟中，所述環孢菌素H粗品與所述苯基氨基甲酸酯化β-環糊精硅膠的重量比為1：10-100；

所述層析柱的徑高比大于10。

2.根據權利要求1所述的一種環孢菌素H的分離純化方法，其特征在于，所述極性溶劑為乙腈、甲醇、乙醇的一種或者多種。

3.根據權利要求1所述的一種環孢菌素H的分離純化方法，其特征在于，所述濃縮結晶步驟中，將洗脫步驟中收集的環孢菌素H含量95%以上的洗脫液減壓濃縮至無極性溶劑后，再用乙酸乙酯進行萃取。

4.根據權利要求1所述的一種環孢菌素H的分離純化方法，其特征在于，所述濃縮結晶步驟中，將洗脫步驟中收集的環孢菌素H含量95%以上的洗脫液用截留分子量不大于200的聚醚砜納濾膜進行濃縮，濃縮至原體積的五分之一后，再用乙酸乙酯進行萃取。

5.根據權利要求1所述的一種環孢菌素H的分離純化方法，其特征在于，所述濃縮結晶步驟中，所述稠狀濃縮物與丙酮、甲基叔丁基醚、去離子水的重量比為1:1-3:1:0.001。

6.根據權利要求1所述的一種環孢菌素H的分離純化方法，其特征在于，所述濃縮結晶步驟中，所述稠狀濃縮物與正己烷的體積比為1:4-6。