[發(fā)明專利]一種基于磁珠技術(shù)提取血液基因組DNA的試劑盒及其方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711317707.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-12
• 公開（公告）號(hào): CN108070585A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郎秋蕾;梁洪;殷楠楠;袁丹;婁奇彬;李倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州聯(lián)川生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開了一種基于磁珠技術(shù)提取血液基因組DNA的試劑盒及其方法，屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域。該試劑盒包括裂解液、紅細(xì)胞裂解液、磁珠、磁珠漂洗液及DNA洗脫液五種成分。本發(fā)明試劑盒不包含有機(jī)溶劑，對(duì)全血細(xì)胞進(jìn)行裂解后，通過(guò)磁珠吸附DNA分子，再通過(guò)漂洗去除雜質(zhì)，最后對(duì)磁珠上的DNA分子進(jìn)行洗脫，獲得高質(zhì)量的基因組DNA。該試劑盒具有操作簡(jiǎn)單快速、提取效率高、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)；提取的血液基因組DNA純度高，能夠滿足后續(xù)如PCR擴(kuò)增、基因測(cè)序等科研或臨床診斷分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及一種基于磁珠技術(shù)提取血液基因組DNA的試劑盒，可應(yīng)用于不同物種的新鮮或冷凍抗凝血液DNA提取。本發(fā)明還涉及應(yīng)用該試劑盒從血液樣本中提取DNA的方法。

背景技術(shù)

血液是流動(dòng)在心臟和血管內(nèi)的不透明紅色液體，主要成分為血漿和血細(xì)胞。全基因組DNA(genomic DNA)是遺傳信息的載體，為單倍體細(xì)胞中包括編碼序列和非編碼序列在內(nèi)的全部基因信息。從人體或動(dòng)物的血液中提取高質(zhì)量的DNA是基因檢測(cè)、精準(zhǔn)醫(yī)療及其他分子生物學(xué)研究的重要前提。血液DNA提取和純化的一般程序?yàn)椋浩扑榧t細(xì)胞、離心沉淀白細(xì)胞、破碎白細(xì)胞、沉淀去蛋白、分離和純化DNA。

酚/仿抽提沉淀法是DNA的經(jīng)典提取方法，其標(biāo)準(zhǔn)程序是多次重復(fù)苯酚、氯仿等有機(jī)溶劑抽提使蛋白質(zhì)變性沉淀于有機(jī)相，而核酸保留在水相，達(dá)到分離核酸的目的。該法提取的DNA純度高，但操作步驟繁瑣，工作量大，且提取效率低下，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化應(yīng)用。另外，酚、氯仿和異丙醇等有機(jī)溶劑易造成環(huán)境污染，同時(shí)有損操作者健康。

非有機(jī)溶劑提取法采用細(xì)胞裂解液使白細(xì)胞釋放DNA，使用蛋白酶K、蛋白酶E和強(qiáng)堿(NaOH或KOH)等對(duì)蛋白質(zhì)和RNA進(jìn)行充分消化分解，在高鹽的條件下用乙醇直接沉淀分離純化DNA。該方法避免了使用有毒的有機(jī)溶劑，提取的DNA純度較高，但其需要的血液樣本量大，單獨(dú)使用蛋白酶消化時(shí)間長(zhǎng)，可能對(duì)白細(xì)胞裂解不充分，另外使用強(qiáng)堿對(duì)操作者健康不利，也會(huì)影響后續(xù)PCR擴(kuò)增效率。此外，硅膠膜離心吸附柱法也較為常見，但提取的gDNA容易產(chǎn)生拖尾，表明純度不高，或有降解的產(chǎn)生，同樣不適合大規(guī)模使用。

近年來(lái)，磁珠法開始應(yīng)用于不同體系DNA的提純工作中。利用磁珠表面以共聚合及表面修飾等方式引入的活性基團(tuán)和單克隆抗體，制備成帶有磁性的親和吸附劑。在生物樣品與這些具有磁性作用的親和吸附劑共同孵育時(shí)，目標(biāo)分子能夠迅速被磁珠捕獲，在磁場(chǎng)作用下從液相中沉降下來(lái)，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的洗滌，從而分離得到表面結(jié)合有目標(biāo)分子的磁珠復(fù)合物。

磁珠法操作簡(jiǎn)單，在微量的血液樣本中也能高效提取全基因組DNA，并且可以在微孔板中以自動(dòng)化的方式進(jìn)行，省時(shí)省力，同時(shí)減少有毒試劑的危害，相比傳統(tǒng)的DNA提取方法，具備無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)，是未來(lái)核酸提取發(fā)展的重要方向。當(dāng)前，基因測(cè)序、精準(zhǔn)醫(yī)療等研究領(lǐng)域單個(gè)項(xiàng)目需要處理的DNA樣品數(shù)量就可以達(dá)到幾萬(wàn)、幾十萬(wàn)甚至上百萬(wàn)個(gè)，為更有效的配合磁珠法使用，研究人員迫切需求一種基于磁珠的高效、方便、可靠、高通量的提取血液全基因組DNA的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種安全快速?gòu)难褐刑崛』蚪MDNA的方法，克服了現(xiàn)在常用方法中有害溶劑對(duì)人體危害的影響，省時(shí)省力，節(jié)約成本，且提取的基因組DNA純度高。

在本發(fā)明的一方面，提供一種基于磁珠技術(shù)提取血液基因組DNA的試劑盒，包含裂解液、紅細(xì)胞裂解液、自研磁珠、磁珠漂洗液、DNA洗脫液；所述細(xì)胞裂解液包括Tris-HCl、EDTA、NaCl及SDS；所述紅細(xì)胞裂解液包括NH4Cl、KHCO3和Na2EDTA；所述磁珠為粒徑1-2μm單分散磁性微球；所述磁珠漂洗液為乙醇溶液；所述DNA洗脫液為Tris-HCl。