[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于磁珠技術(shù)提取血液基因組DNA的試劑盒及其方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711317707.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108070585A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郎秋蕾;梁洪;殷楠楠;袁丹;婁奇彬;李倩
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 杭州聯(lián)川生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種基于磁珠技術(shù)提取血液基因組DNA的試劑盒，所述試劑盒包含裂解液、紅細(xì)胞裂解液、磁珠、磁珠漂洗液及DNA洗脫液，其特征在于：

所述裂解液包括Tris-HCl、EDTA、NaCl、SDS；

所述紅細(xì)胞裂解液包括NH4Cl、KHCO3和Na2EDTA；

所述磁珠為粒徑1-2μm單分散磁性微球；

所述磁珠漂洗液為乙醇溶液；

所述DNA洗脫液為T(mén)ris-HCl。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的裂解液中Tris-HCl的濃度為50-100mmol/L(pH7.0-8.0)，EDTA濃度為10-20mmol/L，NaCl濃度為0.5-1.0mol/L，SDS體積分?jǐn)?shù)為1.0-1.5％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的紅細(xì)胞裂解液中NH4Cl濃度為100-200mmol/L、KHCO3濃度為10-20mmol/L，Na2EDTA濃度為0.1-0.2mmol/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的磁珠漂洗液中乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為70％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的DNA洗脫液中Tris-HCl濃度為10-20mmol/L(pH7.0-8.0)。

6.一種使用如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的基于磁珠技術(shù)提取血液基因組DNA的試劑盒的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

①取血液樣品200μL，加紅細(xì)胞裂解液400μL，混合均勻后室溫靜置1-3min，12000g離心1-3min，吸棄上清。

②在沉淀中加入100-200μL裂解液，60-70℃孵育10-15min。

③加入100-200μL磁珠溶液，混合均勻后室溫靜置5-10min，磁力架放置5-10min，吸棄上清。

④加入200-300μL磁珠漂洗液重懸磁珠核酸混合物，洗滌2-3次，吸干殘余液體。

⑤開(kāi)蓋室溫靜置5-10min，加入20-50μL DNA洗脫液，吹打混勻后室溫靜置2-5min。

⑥磁力架上放置5-10min，轉(zhuǎn)移上清至一個(gè)新的無(wú)核酸酶管，定量質(zhì)檢后備用或-20℃保存。