[發(fā)明專利]一種魷魚性腺糖復(fù)合物的制備方法及其水解物的亞鐵絡(luò)合物的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711317036.2
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN108148109A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 聞?wù)?/a>;湯震
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海洋大學(xué)
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C12P21/06;C07K1/107
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務(wù)所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種魷魚性腺糖復(fù)合物的制備方法，其特征是，所述的制備方法包括以下幾個步驟：

（a）預(yù)處理：取冷凍的魷魚，使之自然解凍軟化，取其性腺并搗碎呈泥狀，冷凍干燥后將其粉碎，依次過40目篩和60目篩，得到粉末狀魷魚性腺，使用有機溶劑對其進行索氏提取進行脫脂，脫脂時間為10-18小時，脫脂結(jié)束后蒸干有機溶劑，得到脫脂魷魚性腺粉；

（b）粗提：取步驟（a）中得到的脫脂魷魚性腺粉置于氫氧化鈉/硼氫化鈉水溶液中攪拌提取，氫氧化鈉/硼氫化鈉混合水溶液與脫脂魷魚性腺粉的以質(zhì)量計液料比為10-40:1，提取溫度為20-40℃，提取時間為2-5小時，提取結(jié)束后4000r/min離心分離10分鐘，取上層清液，在去離子水中透析15-24小時，透析結(jié)束后濃縮至原體積的1/10，得到魷魚性腺糖復(fù)合物粗提液；

（c）純化：取步驟（b）中得到的魷魚性腺糖復(fù)合物粗提液，隨后加入魷魚性腺糖復(fù)合物粗提液體積1/5-1/2的Sevag試劑，充分?jǐn)嚢?0-30分鐘，取上層清液重復(fù)純化步驟1-3次，最后一次得到的上層清液置于離心機中以4000r/min的速度離心5-20分鐘，取上層清液，得到魷魚性腺糖復(fù)合物純化液，冷凍干燥后得到魷魚性腺糖復(fù)合物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魷魚性腺糖復(fù)合物的制備方法，其特征是，所述的步驟（a）中的有機溶劑為丙酮、乙醇、異丙醇或乙醚中的一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魷魚性腺糖復(fù)合物的制備方法，其特征是，所述的步驟（b）中氫氧化鈉在混合水溶液中的濃度為0.1-1.5mol/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種魷魚性腺糖復(fù)合物的制備方法，其特征是，所述的步驟（b）中硼氫化鈉在混合水溶液中的濃度為0-0.4mol/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魷魚性腺糖復(fù)合物的制備方法，其特征是，所述的步驟（b）中采用截留分子量為14000Da的透析袋進行透析。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魷魚性腺糖復(fù)合物的制備方法，其特征是，所述的步驟（c）中Sevag試劑為三氯甲烷:正丁醇體積比為4:1混合液。

7.一種魷魚性腺糖復(fù)合物水解物的亞鐵絡(luò)合物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法如下：

（d）水解：取權(quán)利要求1中得到的魷魚性腺糖復(fù)合物10份溶解于20-50份水中，水浴加熱升高溫度至55℃，然后加入木瓜蛋白酶1.5-4.5份，攪拌反應(yīng)2-5小時后，沸水浴10-20分鐘滅酶，冷卻至4℃，10000r/min離心15-25分鐘，取上清液抽濾，得酶解液，凍干，得干燥的魷魚性腺糖蛋白水解物；

（e）取步驟（d）中的魷魚性腺糖蛋白水解物加入恰好能夠完全溶解魷魚性腺糖蛋白水解物量的蒸餾水，然后在魷魚性腺糖蛋白水解物水溶液中加入濃度為0.1-2.4mg/L的硫酸亞鐵溶液，以亞鐵離子計，魷魚性腺糖蛋白與亞鐵離子的質(zhì)量比為20-200:1，在35-45℃下攪拌絡(luò)合0.5-10小時，8000r/min離心5min，取上層清液測定吸光值，計算絡(luò)合率，下層沉淀經(jīng)透析冷凍干燥后得到魷魚性腺糖復(fù)合物水解物的亞鐵絡(luò)合物。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種魷魚性腺糖復(fù)合物水解物的亞鐵絡(luò)合物的制備方法，其特征是，所述的步驟（e）中的上層清液經(jīng)過0.45μm的一次性微孔濾膜過濾。