[發明專利]一種用于傷口愈合的干細胞分泌因子精華液的制備方法

在審

• 申請號: 201711313308.1
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN109908177A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 趙偉;占天焱;黃慶雷
• 申請（專利權）人: 北京弘潤天源基因生物技術有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K8/99;A61Q19/00;A61P17/02;C12N5/0775
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本發明公開了一種適用傷口愈合的臍帶間充質干細胞分泌因子的制備方法，它主要包括如下步驟：（1）臍帶組織的選取；（2）分離并培養間充質干細胞；（3）獲取P2代細胞并繼續培養，收集培養上清原液；（4）對步驟（3）中獲取的上清原液超濾濃縮獲取精華液，并除菌安瓿瓶分裝；（5）對步驟（3）中獲取的干細胞培養上清原液和步驟（4）中獲取的濃縮精華液，分別做傷口愈合因子：白細胞介素8（IL8），白細胞介素6（IL6），轉化生長因子β1（TGF?β1），單核細胞趨化蛋白1（MCP?1），血管內皮生長因子，GM?CSF和TIMP?1的含量檢測。本發明方法可以有效去除間充質干細胞培養上清液的雜質，而且得到的傷口愈合因子的純度和產量都很高，安瓿瓶包裝保障了精華液的產品質量，方便使用，為傷口愈合的佳品。

技術領域

本發明涉及一種用于傷口愈合精華液的制備方法，特別涉及一種臍帶間充質干細胞傷口愈合因子精華液的制備方法。

背景技術

傷口愈合是一個涉及多種類型細胞的復雜過程，正常情況下傷口的修復過程包括三個階段，炎癥期、肉芽組織形成期、組織改造塑型期，在這一過程中有一系列已知的細胞因子和生物化學反應發生，大量研究表明細胞因子在傷口愈合的各個階段均發揮著重要的作用，他們通過介導細胞與細胞、細胞與細胞外基質的相互作用，參與組織修復、更新和再生，已有研究指出通過添加外源性細胞因子，可以有效改善傷口愈合狀況，具有重要的臨床意義。

研究表明表皮生長因子（EGF）能夠促進，加速核酸代謝，加快細胞從G-GI期轉化，促進細胞的有絲分裂，促進表皮細胞增殖，從而促進傷口愈合。

轉化生長因子β1能促進表皮細胞移動，趨化巨噬細胞和纖維母細胞，促進細胞外基質合成和塑形，與疤痕形成有重要關系。

白介素6可促進角質細胞遷移和瘢痕組織形成，白介素8有加速角質細胞增殖和上皮組織再生的能力，在炎癥反應中均發揮重要作用。

很多精細的化工產品多含有乙醇、著色劑、鉛汞等對人體肌膚有還得物質，消費者在使用過程中對身體是有害的，嚴重可能造成皮炎及感染問題，并且都不具有生物活性，不能從根本上改善皮膚的新陳代謝和生存環境,更不能達到傷口快速愈合的目的。

干細胞分泌因子中含有各種生理作用極強的生長因子，其作用備受矚目，由于其在傷口愈合過程中發揮著重要作用，其有望在皮膚、角膜、消化道傷口的愈合中發揮重要作用，并且可以用于美容業中紋眉、美瞳線后的的皮膚修復，市場前景廣闊。

發明內容

本發明提供了一種分離間充質干細胞分泌因子的方法，它包括如下步驟。

（1）臍帶組織選取：選取1個健康產婦正常分娩或者剖腹產臍帶組織，為孕婦自愿的前提下選取，2℃～8℃條件下保存，24小時內進行處理。

（2）分離并培養臍帶間充質干細胞：根據步驟（1）中取得的臍帶組織，在24小時內進行間充質干細胞的分離和培養，過程如下：將臍帶組織置于百級超凈臺環境下的培養皿中，用PBS將組織表面的血跡沖洗干凈，將臍帶組織剪成小段，并將臍帶內血管以及臍帶表面羊膜組織去除，剩余的部分用鑷子和手術刀分離開，將組織塊轉移到T175的培養瓶中，加入臍帶間充質干細胞專用培養基，37℃、5%CO₂培養箱中進行培養。

（3）獲取P2代細胞：經過對步驟（2）中的組織進行培養，觀察臍帶間充質干細胞的生長狀態，發現每塊組織都有細胞爬出時將培養瓶中的組織塊取出，繼續培養，當匯合度達到90%左右的時候胰蛋白酶消化，獲取P1代細胞；P1代細胞轉移到T175的培養瓶中繼續培養，當回合度達到90%左右時胰蛋白酶消化，獲得P2代細胞。