[發明專利]一種重組溶瘤痘苗病毒及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201711310440.7
• 申請日: 2017-12-11
• 公開（公告）號: CN108165536A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 錢文斌;雷文;王世兵
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K48/00;A61K35/768;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 黃歡娣;邱啟旺

本發明公開了一種重組溶瘤痘苗病毒及其制備方法與應用，所述病毒的胸腺嘧啶核苷激酶(TK)區包含SEQ ID NO.1所示的PD1全長抗體的編碼序列。本發明將基因治療的抑瘤效果與病毒治療的溶瘤效應有效結合起來，制備了一種可高效表達PD1全長抗體基因的溶瘤痘苗病毒。在溶瘤病毒發揮溶瘤效應裂解腫瘤細胞的同時，大量表達PD1全長抗體，抑制T細胞表面PD1的活性，激活T細胞免疫應答，發揮雙重的抗腫瘤效果。相對于單純的基因療法或者病毒療法增強了其對惡性B細胞淋巴腫瘤的殺傷能力。采用病毒復制相關基因缺失的方式，缺失痘苗病毒基因組的TK區，確保病毒在異常增殖的腫瘤細胞內特異性復制，而在正常的細胞中則不能復制，大大增強了溶瘤痘苗病毒載體的安全性。

技術領域

本發明屬于基因工程學，免疫學和腫瘤學，涉及一種重組溶瘤痘苗病毒及其制備方法與應用。

背景技術

惡性淋巴瘤的發病率占整個癌癥患者的3-5％，每年有452,000新增患者。大于90％的成人患者來源于成熟的B細胞，提示B細胞淋巴腫瘤是威脅人類健康的重要疾病之一。

免疫治療是繼手術，放療，化療，分子靶向治療后又一種癌癥治療新方法。在各種癌癥免疫治療方法中，免疫檢查點抑制劑是近年來獲得突出療效的藥物之一。免疫檢查點是預防免疫系統過度激活的抑制性通路，在被激活的免疫細胞表面存在一些蛋白如CTLA4，PD1等在過度免疫反應時起到“剎車”作用，然而在腫瘤發生時，這些蛋白因過度表達而持久地為免疫系統發出抑制信號，從而促進腫瘤的免疫逃逸。故免疫檢查點抑制劑在癌癥的免疫治療中起著重要的作用。

PD-1/PD-L1信號通路是阻斷免疫檢查點策略的最為重要的靶點之一。在腫瘤發生時可導致T細胞表達PD1，多種類型癌癥的腫瘤侵潤淋巴細胞(TIL)也表達PD-1。同時研究表明多種癌細胞高表達PD-L1，包括淋巴瘤，白血病，惡性黑色素瘤和非小細胞肺癌(NSCLC)等。PD-1與癌細胞表面的PD-1配體(PD-L1或者PD-L2)結合抑制T細胞的活化，導致特異性T細胞耗竭或失能。

在B細胞淋巴腫瘤上，研究顯示濾泡淋巴瘤(FL)的TIL和外周血T細胞上高表達PD1，且T細胞失能。另一方面，多種B細胞腫瘤，包括彌漫大B淋巴瘤(DLBCL)，原發縱膈大B淋巴瘤(PMBCL)以及睪丸大B淋巴瘤上均大量表達PD-L1。因此，有效地阻斷PD-1/PD-L1信號通路，能夠增強T細胞對B細胞淋巴腫瘤的殺傷。

新近，阻斷免疫檢查點的PD-1和PD-L1單抗和抑制劑已應用于I-III期臨床研究。2015年6月，美國食品及藥物管理局(FDA)批準PD-1單抗nivolumab作為一款治療藥物用于先前經過化療的晚期NSCLC患者。I期臨床研究表明，nivolumab治療NSCLC患者的平均總生存期為14.9個月，1年和3年的生存率為42％和18％。

但是，免疫檢查點抑制劑也有其局限性：(1)多數病人不能獲得持久的完全反應；(2)PD-1單抗治療后約25-30％患者出現嚴重免疫相關副作用(irAEs)；(3)PD-1/PD-L1通路在腫瘤微環境中的特點影響了PD-1單抗的療效。聯合治療是克服免疫檢查點抑制劑局限性的主要研究方向。目前正在研究的策略包括抗PD-1單抗與放化療、小分子靶向藥物、其他免疫檢查點抑制劑或溶瘤病毒聯合。