[發(fā)明專利]一種稻米淀粉粒斷面的制備及觀察分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711306279.6
• 申請(qǐng)日: 2017-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN108107065B
• 公開（公告）日: 2019-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉巧泉;張昌泉;陸彥;李錢峰;張曉敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N23/2202
• 分類號(hào): G01N23/2202;G01N23/2251
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.一種稻米淀粉粒斷面的制備及觀察分析方法，其特征在于：選擇暗胚乳和糯稻稻谷；手動(dòng)剝殼獲得糙米或者選擇機(jī)械脫殼、出精后無明顯裂紋的精米，并用干冰-液氮混合物速凍；迅速斷裂；修塊并固定在載物臺(tái)；將固定好的樣品置于離子濺射噴鍍儀內(nèi)噴金鍍膜，噴金時(shí)間60秒，噴完后立即到掃描電子顯微鏡上進(jìn)行觀察；將掃描電子顯微鏡的電壓與電流分別調(diào)為15kv和10μA，工作距離在7.5-8.0mm之間；在40倍放大倍數(shù)下調(diào)整掃描區(qū)域，在3000倍放大倍數(shù)下選擇斷面平整、清晰的區(qū)域進(jìn)行拍照保存圖片，同時(shí)在拍照區(qū)域內(nèi)選擇孔洞明顯的部位進(jìn)行10000倍拍照和保存圖片；利用像素分析軟件對(duì)保存的圖片進(jìn)行分析，得到單個(gè)淀粉粒平均孔洞數(shù)目、淀粉粒孔洞的平均直徑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的稻米淀粉粒斷面的制備及觀察分析方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)樣品選擇和準(zhǔn)備：選擇自然干燥或烘干的暗胚乳和糯稻稻谷，手動(dòng)剝殼獲得糙米或者選擇機(jī)械脫殼、出精后無明顯裂紋的精米，選飽滿的糙米或精米進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)；

(2)樣品斷裂：用鑷子夾住單粒米樣置于干冰-液氮混合物中速凍1-2分鐘，取出后迅速用尖頭鋼絲鉗固定籽粒一端，另一端用鑷子用力掰斷；

(3)修塊：選取斷面平整的半粒米樣，用鑷子固定帶有斷面的一段，用刀片切除斷面相對(duì)的一部分，并修整切口，使切口平整且與米粒保持垂直；修整后的斷面厚度保留2-3mm，修整的斷面作粘貼面；

(4)樣品固定：用鑷子將修整后斷面朝下粘在樣品臺(tái)上的導(dǎo)電膠上，確保樣品垂直放置且整個(gè)操作過程不能用手觸碰上斷面；

(5)噴金：將粘好的樣品置于離子濺射噴鍍儀內(nèi)噴金鍍膜，噴金時(shí)間60秒，噴完后立即到掃描電子顯微鏡上進(jìn)行觀察；

(6)掃描電子顯微鏡觀察：將掃描電子顯微鏡的電壓與電流分別調(diào)為15kv和10μA，工作距離在7.5-8.0mm之間；在40倍放大倍數(shù)下調(diào)整掃描區(qū)域，在3000倍放大倍數(shù)下選擇斷面平整、清晰的區(qū)域進(jìn)行拍照保存圖片，同時(shí)在拍照區(qū)域內(nèi)選擇孔洞明顯的部位進(jìn)行10000倍拍照和保存圖片；

(7)分析：利用像素分析軟件對(duì)步驟(6)保存的圖片進(jìn)行分析，得到單個(gè)淀粉粒平均孔洞數(shù)目、淀粉粒孔洞的平均直徑。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的稻米淀粉粒斷面的制備及觀察分析方法，其特征在于步驟(7)具體是：首先統(tǒng)計(jì)100粒以上可見明顯孔洞的淀粉粒中孔洞的數(shù)目，計(jì)算平均值，得到單個(gè)淀粉粒平均孔洞數(shù)目；同時(shí)，利用ImageJ軟件的測(cè)量功能進(jìn)行淀粉粒中間空洞直徑的分析，測(cè)量100粒以上，計(jì)算得到淀粉粒孔洞的平均直徑。